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400-6111-883
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400-6111-883
JC-10 线粒体膜电位荧光探针
产品货号:40707ES03
产品规格:1mg (2 mg/mL)
产品价格:¥680.00
类别:荧光探针/细胞染色

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  • HB170419


    产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    外观

    储存

    价格(元)

    JC-10 线粒体膜电位荧光探针

    40707ES03

    1mg (2 mg/mL)

    溶液

    -20℃避光保存

    680.00

    JC-10 线粒体膜电位荧光探针

    40707ES08

    5 mg

    红色粉末

    -20℃避光保存

    2763.00


    产品描述

    线粒体膜电位荧光探针JC-10JC-1升级产品同样可用于检测线粒体膜电位的变化。因JC-1虽然在许多实验中被广泛应用,但是其水溶性很差,即使在1 μM浓度的条件下JC-1也会在水缓冲液中析出。而JC-10具有更好的水溶性,可以在某些需要高浓度染料的实验中替代JC-1。

    正常细胞内,JC-10选择性聚集在线粒体基质中形成可逆的红色荧光聚合物(Ex=540 nm, Em=590 nm);不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失,JC-10由多聚体转变为单体形式存在于胞浆中,产生绿色荧光(Ex=490 nm, Em=525 nm)。JC-10不仅可用于定性检测,因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测,因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。这两种颜色的变化可以用流式细胞仪上的标准滤光器检测到,绿色荧光可用FL1通道分析,红色荧光可用FL2通道分析。除了用于流式细胞术,也可以用于荧光成像和荧光酶标板检测平台

    在一些细胞系中JC-10有着比JC-1更好的表现。不过,JC-10的性能表现极具细胞依赖性特征。


    产品性质

    化学名称(Chemical name

    5,6 -Dichloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide; Enhanced JC-1;

    分子式(Formula

    C25H27Cl2IN4

    分子量(Molecular Weight

    583.34

    纯度(Purity

    95%HPLC

    外观(Appearance

    红色粉末

    溶解性(Solubility

    溶于DMSO

    荧光光谱

    Fluorescent spectrum

    单体形式(monomer form):Ex=490 nm, Em=525 nm

    聚合物形式(J-aggregate form):Ex=540 nm, Em=590 nm


    运输与保存方法

    冰袋(wet ice)运输。粉末-20℃干燥避光保存,至少一年有效。储存液分装成单次使用量,-20℃干燥避光保存,避免反复冻融,约一年有效。


    注意事项

    1JC-10是光敏感性的,所有染色步骤的操作过程中避免强光接触。

    2JC-10染色完成后,立即进行后续的结果分析非常必要;

    3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


    使用方法

    工作液配制:

    1JC-10粉末(5 mg):直接加2.5 mLDMSO到粉末内,室温颠倒混匀使其充分溶解,即得到2 mg/mL(约3 mM)的储存液。溶液分装成小量储存于-20,避光干燥,避免反复冻融。

    2JC-10储存液(1 mg in DMSO):本品是JC-10DMSO储存液,浓度为2 mg/mL(约3 mM)。使用者需要根据单次用量来分装,-20避光干燥,避免反复冻融。

    3)工作液配制(现配现用):将冻存的储存液置于室温充分融化,之后用HHBS(1×Hanks with 20 mM Hepes buffer, pH 7.0)或其他缓冲液(pH 7-8,含0.02% Pluronic® F-127)配制成10-30 µM 1×工作液。涡旋混匀。

    注:对于某些细胞,pH 8情况下可能阻止JC-10渗透入细胞

    JC-10染色步骤(荧光酶标

    1)细胞准备

    贴壁细胞: 细胞养过夜使其密度达到2×104~8×104 cells/well/90 μL(96孔板)或者5×103~2×104cells/well/20μL (384孔板)。

    悬浮细胞:离心后重新将细胞悬浮在培养液中1×105~2×105 cells/well/90 μL(多聚赖氨酸包被的96孔板)或者 2.5×103~5×104 cells/well/20 μL(多聚赖氨酸包被的384孔板)。实验前800 rpm离心2分钟。注意:不同的细胞系需要根据具体情况优化凋亡实验用的最佳细胞密度。

    2)用实验药物10 µL 10×化合物)处理细胞一段时间以诱导细胞凋亡(例如,用camptothecin处理Jurkat细胞4-6 h)。空白对照(只有培养基不含细胞)加入相同量的药物。 

    注:药物处理前没有必要清洗细胞。但是,如果药物对血清敏感,可在加入药物前吸掉培养基和血清因子。然后加入等量体积的HBSS溶液到孔内。或者细胞直接培养在无血清培养基内。

    3)加入100 µL/孔(96孔板)或25 µL孔(384孔板)JC-10工作液。

    4375% CO2孵育15-60 min。具体孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。每次实验建议优化体系。
    5)直接进行荧光变化检测,记录Ex/Em = 500/525 nmFITC通道和540/595 nmTRITC通道)的荧光

    ,然后计算红色荧光信号与绿色荧光信号的比值,用来判断细胞健康程度。

    (可选)或者,吸JC-10工作液,加入100 µL/孔(96孔板)或25 µL/孔(384孔板)HHBS,再进行后续的荧光酶标仪检测

    JC-10染色步骤(荧光显微镜或流式细胞仪

    1)培养细胞过夜使其在药物处理以诱导凋亡时的密度为:5×105~1×106 cells/mL选择实验药物处理细胞一段时间以诱导细胞凋亡(例如,用camptothecin处理Jurkat细胞4-6 h)

    注:进行凋亡诱导时的细胞密度建议不超过1×106 cells/mL,也可根据自己的细胞类型培养至合适的密度。

    2)离心,去上清,每管得到1-5×105细胞。

    3500 µL JC-10工作液重悬细胞。

    4)室温孵育或37 5%CO2孵育15-60 min,需避光。具体孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。

    5)用荧光显微镜分别观察Ex/Em = 490/525 nmFITC通道)和540/595 nmTRITC通道)的荧光变化;或者用流式细胞仪FL1和FL2通道进行检测

    (可选)或者,吸JC-10工作液,加入100 µL /孔(96孔板)或25 µL/孔(384孔板)HHBS,再进行后续的荧光显微镜检测