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Lymphocyte Separation Medium 1.077 淋巴细胞分离液1.077
产品货号:40503ES60
产品规格:100mL
产品价格:¥219.00
类别:细胞分离与消化

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  • HB180709


    产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    储存

    价格(元)

    Lymphocyte Separation Medium 1.077 淋巴细胞分离液1.077

    40503ES60

    100mL

    室温

    219.00

    Lymphocyte Separation Medium 1.077 淋巴细胞分离液1.077

    40503ES76

    5×100mL

    室温

    989.00


    产品描述

    淋巴细胞分离液(Lymphocyte Separation Medium, LSM)是一种滤膜除菌的即用型分离液,用于体外分离人外周血淋巴细胞,也可以从其他组织中分离淋巴细胞,包括脐带血和骨髓细胞等。

    100mL包含6.2g聚蔗糖和9.4g泛影酸钠。20℃下密度是1.0770-1.0800g/mL


    工作原理

    用去纤维蛋白或肝素处理人血,以11的比例用生理盐水或平衡盐溶液稀释,在分离溶液中分层,低速离心30min。离心过程中,由于差速迁移最终形成不同的细胞层。

    红细胞和多形核粒细胞,它们通过梯度迁移至管底。由于其密度不同,淋巴细胞和其他单个核细胞(单核细胞和血小板)分布在血浆和LSM两层之间。淋巴细胞可以通过吸取分界层溶液回收,最后进一步清洗去除血小板,LSM和血浆。


    运输与保存方法

    室温运输、保存(15-30 °C)。


    注意事项


    1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;

    2)稀释去纤维蛋白血液或肝素化血液用的生理盐水为无菌液体;

    3)为保持淋巴细胞的活性,应该采血后尽快进行分离。分离细胞层实际上是单个核细胞层,包括淋巴细胞和单核细胞。


    操作方法
    用于去纤维蛋白或抗凝血剂处理过的人体血液;对于其他物种或者其他组织的血液,需要对此程序做出一定的改进

    1. 轻轻颠倒瓶子使LSM充分混合; 

    2. 无菌条件转移3 mL LSM15 mL离心管中; 

    3. 2 mL 生理盐水混合2 mL去纤维蛋白血液或肝素化血液; 

    4. 小心将稀释血液加入含有3 mL LSM(室温)的15mL离心管中,在血液和LSM中形成一个明显的分层。不要将稀释血液混合入LSM中;

    5. 室温下400xg离心15-30min,离心可以沉淀红细胞和多形核白细胞,同时可以在LSM上形成一层单核淋巴细胞,如下图所示(分层情况从上到下依次为血浆层-单个核细胞层-LSM-RBC颗粒); 

    6. 吸出淋巴细胞层上方2-3mm的血浆; 

    7. 吸取淋巴细胞层以及它下面一半的LSM层,并转移到另外一个离心管。加入等体积的平衡盐缓冲液至离心管内的淋巴细胞层中,室温(18-25°C)离心10分钟,离心速度设定在既不损伤细胞又能沉淀细胞的范围,例如160 – 260 xg(清洗去除LSM,并降低血小板的百分比); 

    8. 再用平衡盐缓冲液清洗细胞,最后取适当的培养基(实验者所用)重悬细胞。

    图片14.png