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400-6111-883
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400-6111-883
UNICON™ HotStart Taq DNA Polymerase (抗体法热启动Taq酶)
产品货号:10113ES60
产品规格:100 U
产品价格:¥216.00
类别:热启动PCR

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    储存

    价格(元)

    UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase (抗体法热启动Taq酶)

    10113ES60

    100 U

    -20

    216.00

    UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase (抗体法热启动Taq酶)

    10113ES76

    500 U

    -20

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    3000 U

    -20

    3665.00


    产品描述

    UNICON®HotStart Taq DNA PolymeraseUNICON™ Taq抗体和Hieff® Taq DNA Polymerase货号10101ES)的混合产品UNICON™ Taq抗体与Hieff® Taq DNA Polymerase具有很高的亲和力高温50℃处理30 min,依旧可以封闭Hieff® Taq DNA Polymerase的活性。本品在预变性温度下加热30 sec完全失活,释放出DNA聚合酶活性。使用该热启动taq酶可以有效抑制引物非特异性退火导致的扩增。

    UNICON®HotStart Taq DNA Polymerase适用于热启动PCR和qPCR。本品中的Hieff® Taq DNA Polymerase是热稳定重组型DNA聚合酶,具有较高的模板亲和力,非常适合低拷贝模板的扩增。扩增产物具有3′-dA,可轻松克隆用于T载体。


    产品组分

    编号

    组分

    产品编号/规格

    10113ES60(100 U)

    10113ES76(5×100 U)

    10113-A

    5×UNICON® HotStart Taq Buffer (Mg2+ Plus)

    1 mL

    5×1 mL

    10113-B

    dNTP Mix (10 mM each)

    100 μL

    5×100 μL

    10113-C

    UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase (5 U/μL)

    20 μL

    5×20 μL


    产品应用

    低拷贝基因扩增基因型鉴定、菌落PCR


    活性定义

    用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,7430 min内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。


    质量控制

    DNA聚合酶活性封闭性检测:1×UNICON® HotStart Taq Buffer (Mg2+ Plus)中65℃孵育30 min,活性释放低于5%。

    DNA聚合酶活性释放检测:1×UNICON® HotStart Taq Buffer (Mg2+ Plus)中95℃加热30 sec,活性释放高于95%。

    核酸外切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和0.6 μg λ-HindIII,74℃孵育1 h,DNA的电泳谱带无变化。

    核酸内切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA74孵育1h,DNA电泳谱带无变化。

    大肠杆菌残留DNA检测50 μL体系中,加入2 U本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带


    运输与保存方法

    冰袋运输。-20保存。


    PCR反应体系(50 μL)

    组分

    体积

    终浓度

    ddH2O

    to 50 μL

    -

    5×UNICON® HotStart Taq Buffer (Mg2+ Plus)

    10 μL

    dNTP Mix (10 mM each)

    1 μL

    0.2 mM

    模板DNA

    适量

    -

    Primer正向 (10 μM)

    2 μL

    0.4 μM

    Primer反向 (10 μM)

    2 μL

    0.4 μM

    UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase (5 U/μL)

    0.5 μL

    2.5 U/50 μL

    1试剂使用:各组分使用前需充分融化混匀。

    2聚合酶浓度:推荐使用2.5 U/50 μL。可以在1.25-5 U/50 μL之间进行优化。

    3PCR Enhancer使用:推荐仅当扩增片段GC含量>60%且优化条件也无法正常扩增时使用。

    4Mg2+终浓度体系终浓度为2 mM。如有特殊需要,可用25 mM MgCl2,以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。

    5不同模板的推荐使用量(50 μL反应体系)

    模板种类

    模板使用量

    基因组DNA

    50 ng-200 ng

    质粒DNA

    100 pg-20 ng

    cDNA

    1-5 μL (不超过反应体系的1/10)


    PCR扩增程序

    循环步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性

    95℃

    1 min

    1

    变性

    95

    30 sec

    35

    退火

    50-60

    30 sec

    延伸

    72

    30 sec/kb

    终延伸

    72

    10 min

    1

    注:

    1退火温度和时间:温度推荐使用50-60。退火温度过低会导致非特异性扩增。引物设计参考荧光定量引物标准。推荐退火时间设置为30 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度和时间。

    2延伸温度和时间温度推荐使用72。时间推荐使用30 sec/kb

    3扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20保存,防止DNA发生降解。


    注意事项

    1推荐使用本公司PCR Enhancer (货号10117ES),以扩增高GC含量的目的基因。

    2推荐使用本公司Hieff Clone™ 货号10907ES10908ES),以进行快速TA克隆。

    3)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


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