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Hieff® Long Taq DNA Polymerase 长片段DNA聚合酶
产品货号:10107ES62
产品规格:125 U
产品价格:¥155.00
类别:长片段PCR

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff® Long Taq DNA Polymerase 长片段DNA聚合酶

    10107ES62

    125 U

    155.00

    Hieff® Long Taq DNA Polymerase 长片段DNA聚合酶

    10107ES78

    5×125 U

    735.00


    产品描述

    Hieff® Long Taq DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase与一种含有3’ →5’外切酶活性的蛋白组成的混合酶,其保真性是Taq DNA Polymerase的6倍,专门用于长片段的扩增。独特的缓冲体系使Hieff® Long Taq DNA Polymerase可扩增长达8 kb的人基因组片段和10 kb左右的质粒模板。PCR扩增产物的3’端带A,可直接用于TA克隆。试剂盒中的PCR Enhancer有助于高GC含量片段的扩增。


    产品组分

    编号

    组分

    产品编号/规格

    10107ES62(125 U)

    10107ES78(5×125 U)

    10107-A

    Hieff® Long Taq DNA Polymerase (5 U/μL)

    25 μL

    25 μL×5

    10107-B

    10× Hieff® Long Taq Buffer(Mg2+ free)

    500 μL

    500 μL×5

    10107-C

    25 mM MgCl2

    1 mL

    1 mL×5

    10107-D

    dNTP Mix (10 mM each)

    100 μL

    100 μL×5

    10107-E

    5 × PCR Enhancer

    125 μL

    125 μL×5

    10107-F

    10 × Loading buffer

    1.25 mL

    1.25 mL×5


    活性定义


    用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,74℃, 30 min内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。


    质量控制


    核酸外切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和1 μg λDNA -HindIII,37℃下孵育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

    核酸内切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和1 μg λDNA,37℃温育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

    大肠杆菌残留DNA检测: 50 μL体系中,加入2 U本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。


    运输与保存方法


    冰袋运输。-20º℃保存,有效期1年。


    注意事项


    为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

     
    PCR反应体系(推荐冰上配制)

    组分

    体积

    ddH2O

    to 50 μL

    10× Hieff® Long Taq Buffer(Mg2+ free)

    5 μL

    25 mM MgCl2

    3-4 μL

    dNTP Mix (10 mM each)

    1 μL

    5 × PCR Enhancer

    适量

    DNA模板 

    适量

    Primer正向 (10 μM)

    2 μL

    Primer反向 (10 μM)

    2 μL

    Hieff® Long Taq DNA Polymerase (5 U/μL)

    0.5 μL

    【注】:

    1)PCR Enhancer:推荐仅当扩增片段GC%> 60%且优化条件也无法正常扩增时用;可能会使保真度有轻微降低。
    2)聚合酶浓度:酶量可在0.25-1 μL之间调整。通常情况下加大酶量可以提高扩增产量,但有可能会使特异性下降。
    3)Mg2+终浓度:对于大多数由本酶催化的PCR反应来说,Mg2+的最优浓度为2 mM;如有特殊需要,可在终浓度1.5-2.5 mM区间内调整Mg2+浓度。
    4)不同模板的推荐使用量(50 μL反应体系)

    模板种类

    用量

    动植物基因组DNA

    10-200 ng

    大肠杆菌基因组DNA

    1-100 ng

    λDNA、质粒DNA

    0.1-10 ng


    PCR扩增程序


    1)目的片段<5 kb

    循环步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性

    94℃

    5 min

    1

    变性

    94℃

    30 sec

    30-35

    退火

    55℃

    30 sec

    延伸

    72℃

    30 sec/kb

    终延伸

    72℃

    7 min

    1

    【注】:退火温度需要根据引物退火温度调整,一般设置成低于引物退火温度1-2℃即可。

    2)目的片段>5 kb

    循环步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性

    94℃

    1-3 min

    1

    变性

    94℃

    10 sec

    30-35

    退火/延伸

    68℃

    30-60 sec/kb

    终延伸

    68℃

    7 min

    1

    【注】:对于> 5 kb的片段,推荐使用长引物, Tm值在68-70℃,把退火/延伸温度合并为68℃。这样可以显著提高扩增特异性。延长延伸时间有助于提高扩增产量。

    HB190523