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400-6111-883
Hieff™ HotStart DNA Polymerase (配体法热启动DNA聚合酶)
产品货号:10110ES72
产品规格:250 U
产品价格:¥186.00
类别:热启动PCR

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    储存

    价格(元)

    Hieff® HotStart DNA Polymerase (配体法热启动DNA聚合酶)

    10110ES72

    250 U

    -20

    186.00

    Hieff® HotStart DNA Polymerase (配体法热启动DNA聚合酶)

    10110ES80

    4×250 U

    -20

    636.00


    产品描述

    Hieff® HotStart DNA Polymerase是经过配体修饰的热稳定Taq DNA Polymerase,该配体可以随温度变化来调节DNA聚合酶活性。在室温下酶活性被完全封闭,经95℃加热后活性才被释放,这样可防止在样品准备及反应升温阶段产生非特异扩增和引物二聚体。Hieff® HotStart DNA Polymerase的激活时间只需要2-3 min,兼容现有的PCR程序。

    Hieff® HotStart DNA Polymerase的反应缓冲液中的组分、浓度都经过优化,使得引物与模板结合的严谨性提高,从而最大程度的减少非特异扩增和引物二聚体,非常适合低拷贝模板的扩增。PCR产物3’端带A,可克隆至T载体。


    产品组分

    编号

    组分

    产品货号(规格)

    10110ES72(250 U)

    10110ES80(4×250 U)

    10110-A

    5×HS PCR Buffer (with Mg2+)

    1.25 mL

    4×1.25 mL

    10110-B

    dNTP mix (10 mM each)

    150 μL

    4×150 μL

    10110-C

    Hieff® HotStart DNA Polymerase (5 U/μL)

    50 μL

    4×50 μL


    产品应用

    低拷贝基因扩增、基因型鉴定、菌落PCR


    性定义

    用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,74 30 min内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。


    质量控制

    核酸外切酶残留检测:10 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74下孵育1 hDNA的电泳谱带不发生变化。

    核酸内切酶残留检测:10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74下孵育1 hDNA的电泳谱带不发生变化。

    大肠杆菌残留DNA检测: 50 μL体系中,加入2 U本品,以ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。


    运输与保存方法

    冰袋运输。-20保存。


    PCR反应体系(50 μL)


    组分

    体积

    终浓度

    ddH2O

    to 50 μL

    -

    5×HS PCR Buffer (with Mg2+)

    10 μL

    dNTP Mix (10 mM each)

    1 μL

    0.2 mM

    模板DNA

    适量

    -

    引物正向 (10 μM)

    2 μL

    0.4 μM

    引物反向 (10 μM)

    2 μL

    0.4 μM

    Hieff® HotStart DNA Polymerase (5 U/μL)

    0.5 μL

    2.5 U/50 μL

    1试剂使用:各组分使用前需充分融化混匀。

    2聚合酶浓度:推荐使用2.5 U/50 μL。可以在1.25-5 U/50 μL之间进行优化。

    3PCR Enhancer使用:推荐仅当扩增片段GC含量>60%且优化条件也无法正常扩增时使用。

    4)Mg2+终浓度体系终浓度为2 mM。如有特殊需要,可用25 mM MgCl2,以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。

    5不同模板的推荐使用量(50 μL反应体系):

    模板种类

    模板使用量

    基因组DNA

    50 ng-200 ng

    质粒DNA

    100 pg-20 ng

    cDNA

    1-5 μL (不超过反应体系的1/10)


    PCR扩增程序

    循环步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性

    95

    5 min

    1

    变性

    95

    30 sec

    35

    退火

    50-60

    30 sec

    延伸

    72

    30 sec/kb

    终延伸

    72

    10 min

    1

    注:

    1退火温度和时间:温度推荐使用50-60。退火温度过低会导致非特异性扩增。引物设计参考荧光定量引物标准。推荐退火时间设置为30 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度和时间。

    2延伸温度和时间:温度推荐使用72。时间推荐使用30 sec/kb。

    3扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20保存,防止DNA发生降解。


    注意事项

    1)推荐使用本公司PCR Enhancer(货号10117ES),以扩增高GC含量的目的基因。

    2)推荐使用本公司Hieff Clone®货号10907ES和10908ES),以进行快速TA克隆。

    3)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


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