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400-6111-883
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400-6111-883
Calcein, AM, Ultrapure Grade 钙黄绿素,超纯级
产品货号:40719ES50
产品规格:1×50 μg
产品价格:¥199.00
类别:荧光探针/细胞染色

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  • 产品信息

    产品名称

    货号

    规格

    储存

    价格(元)

    Calcein, AM, Ultrapure Grade 钙黄绿素,超纯级

    40719ES50

    1×50 μg

    -20℃干燥保存

    199.00

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    40719ES80

    1 mg

    -20℃干燥保存

    2637.00


    产品描述

    Calcein-AM是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂,发绿色荧光(Ex=490 nm,Em=515 nm)。 因其在传统的Calcein(钙黄绿素)基础上引入乙酰甲氧基甲酯(AM)基团,增加了疏水性,使其能够轻易穿透活细胞膜。一旦进入细胞后,Calcein-AM(本身不发荧光)被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子Calcein,从而被滞留在细胞内并发出强绿色荧光。与其它同类试剂(如BCECF-AM和CFDA)相比,由于Calcein, AM细胞毒性极低,是最适合用于活细胞染色的荧光探针,而且不会抑制任何的细胞功能,如增殖和淋巴球的趋化性。

    由于死细胞缺乏酯酶,Calcein, AM仅用于对活细胞的细胞生存能力测试和短期标记。作为核染色染料的碘化丙啶不能穿过活细胞的细胞膜,它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核,并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光(激发:535 nm,发射:617 nm),因此PI仅对死细胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发,因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。而用545 nm激发,仅可观察到死细胞。根据以上特点,Calcein, AM和PI经常被结合用来作为活细胞和死细胞的双重染色。由于不同细胞系的最佳染色条件不同,我们建议个别确定 Calcein, AM 和 PI的合适浓度。

    本品为粉末形式提供的Calcein-AM,超纯级别(≥95%),可与碘化丙啶(PI)(Cat No. 40710ES03)联合使用,用于活细胞和死细胞的同时检测。或者直接购买翊圣提供的Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒(Cat No. 40747ES76)。


    产品性质

    中文名称(Chinese synonym)

    3-O-乙酰胺-2,7-二(羧乙基)-4或5-羧基荧光素,二乙酰甲酯;钙黄绿素乙酰甲酯;

    英文名称(English synonym)

    3,6-Di(O-acetyl)-4,5-bis[N,N-bis(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein,   tetraacetoxymethyl ester

    CAS号( CAS NO)

    148504-34-1

    分子式(Formula)

    C46H46N2O23

    分子量(Mol. Wt.)

    994.86

    纯度(Purity)

    ≥95%(HPLC)

    Ex/ Em(nm)

    490/515

    结构式

                                                                             4.jpg


    运输与保存方法

    冰袋(wet ice)运输。-20℃干燥保存,避免直接暴露于强光下,有效期一年。

     

    注意事项

    1)对于微量试剂,开封前,请稍微离心一下,以保证粉末落入管底。
    2)由于Calcein-AM对湿度非常敏感,本粉末保存的过程中一定要保持干燥。对于配制好的Calcein-AM储存液需要分装冻存,且必须紧紧密封盖子,干燥保存。Calcein-AM工作液必须现配现用。

    3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


    使用方法

    1. 储存液的配制

    本品是以粉末形式提供的,根据工作液的浓度将其配制成1000×的储存液,储存液配制范围可为1~50 mM。例如使用的工作液为5 μM,那么可配制5 mM的储存液,也就是向50 μg Calcein, AM(Mw:994.86)内加入10 μl 细胞培养级别的DMSO(CAS NO. 60313ES60)即可得到所需浓度的储存液。

    2. 染色步骤

    对于大部分细胞,钙黄绿素Calcein, AM的工作液浓度为2-5 μM。由于不同细胞系的最佳染色条件不同,初次实验建议做梯度实验,以确定 Calcein-AM的最适浓度。梯度筛选的原则为使用最低的探针浓度得到最好的荧光结果。
    1)使用时,取一管适量的Calcein, AM储存液(1000×),用PBS(或Hanks和Hepes)缓冲液将其稀释成相应浓度的染色工作液。
            注:有时候可添加一定量的非离子表面活性剂如Pluronic F127(Cat No. 60318ES60)到Calcein AM储存液内来增强其水溶性。制备染色工作液前,取一管需要用的Calcein AM储存液内加入等体积的20% Pluronic F127,使Pluronic F127的终浓度为0.02%。Pluronic F127的Calcein AM溶液不可长期保存,现配现用
    2)对于贴壁细胞,先用胰酶-EDTA消化细胞,离心收集细胞(1000 rpm,3 min)。对于悬浮细胞,直接离心收集细胞。
    3)去上清,用PBS(或者其他缓冲液)充分清洗细胞2~3次,以充分去除残留的酯酶活性。

    4)用1/10细胞培养基体积的Calcein, AM染色工作液重悬细胞,37℃培养细胞15~30分钟。
            注如果细胞本身含有有机阴离子转运体,需加入丙磺舒(probenecid,1-2.5 mM)或者苯磺唑酮(sulfinpyrazone,0.1-0.25 mM)到孵育体系内以降低去酯化染料calcein泄露到胞外。
    5)用PBS(或者其他缓冲液)洗涤细胞两次去除多余的染料。
    注:如有必要,使用含有阴离子转运抑制剂的缓冲液来进行细胞清洗】

    6)用含490 nm激发波长,515 nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。


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