您好,欢迎来到上海翊圣生物科技有限公司官方网站!
400-6111-883
| EN
400-6111-883
IgG MagBeads, Goat anti-Mouse 山羊抗小鼠IgG免疫磁珠
产品货号:47502ES03
产品规格:1 mL
产品价格:¥728.00
类别:流式检测

说明书下载

  • HB180108


    产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    储存

    价格(元)

    IgG MagBeads, Goat anti-Mouse 山羊抗小鼠IgG免疫磁珠

    47502ES03

    1 mL

    2-8℃保存

    728.00


    产品描述

    免疫磁珠分离技术是以高均一性的磁性微球为固相支持物,将免疫配基通过功能基团结合到磁性载体上形成的免疫磁性微球,利用免疫学反应的高度特异性与磁珠特有的磁响应性,实现特异性靶物质分离的技术,具有特异性强、灵敏度高、效率高、操作简单等特点。

    应用羊抗鼠(Goat anti-Mouse)IgG免疫磁珠可根据实验需要选择各种小鼠单抗实现细胞分离。通常使用以下两种分离方式:阳性分离或阴性分离。阳性分离是直接从细胞混合液中分离靶细胞,阴性分离是利用免疫磁珠去除无关细胞,收集游离于磁场中的靶细胞。

    羊抗鼠(Goat anti-Mouse)IgG免疫磁珠可通过直接法或间接法实现细胞分选。直接法是将抗特异细胞表面抗原的Mouse IgG与免疫磁珠表面的羊抗鼠IgG结合,将磁珠结合的细胞与其它细胞分开,达到细胞分选的目的。间接法是先将抗特异细胞表面抗原的Mouse IgG与混合体系中靶细胞表面特异抗原结合,再与羊抗鼠(Goat anti-Mouse)IgG免疫磁珠结合达到细胞分选的目的。


    产品性质

    磁珠含量(Beads Concentration)

    6 mg/mL

    平均粒径(Mean Diameter)

    1.0±5% µm

    结合能力(Binding Capacity)

    0.20 mg Ms IgG/mg


    运输和保存方法

    冰袋运输。2-8℃保存。有效期6个月。


    注意事项

    1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    2)请勿冻存、干燥、加热或离心操作,这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。

    3)产品使用前需剧烈振荡或超声处理,避免磁珠沉降聚集。

    4)磁珠分选缓冲液,推荐使用 PBS,0.5% BSA,2 mM EDTA,0.09%NaN3,pH7.4。
    5)Fc受体(FcR)封闭:在某些实验中,部分抗体会通过其Fc段与不同细胞表面的FcR结合,出现非特异性反应。此时可预先将细胞与IgG或针对FcR的特异性抗体室温孵育5-10 min,一般107细胞中可加入1-10 µg IgG或FcR的特异性抗体进行封闭;反应体系中也可加入5-10%蛋白降低非特异性反应,但蛋白浓度太高会降低分选效率。

    6)实验前应对抗体使用浓度,磁珠与细胞反应比例,反应时间等参数优化以达到最佳的细胞分选效果。
    7)如果分选的细胞进一步用作细胞培养实验,全过程注意无菌操作,分选缓冲液中可不加防腐剂NaN3,磁珠保存液中的防腐剂可用适量无菌缓冲液或细胞培养基洗2次以去除。


    使用方法

    以下为常规操作方式,建议根据具体实验,优化实验方法。
    1)从抗凝血中提取外周血单个核细胞(PBMC),用PBS,5% BSA,0.09% NaN3,pH7.4洗3次,40-70 µm尼龙网过滤去除细胞团块和碎片,调整细胞数为1×108 /mL。

    2)加入适量Mouse IgG,一般1×107 PBMC中加入0.1-20 µg抗体,室温反应30 min。

    3)1000 rpm离心5 min,弃上清。加入1 mL磁珠分选缓冲液重悬细胞,1000 rpm离心5 min,弃上清,洗2次(2×1 mL)。
    4)1 mL磁珠分选缓冲液重悬细胞,加入50 µL免疫磁珠,室温反应30 min,间隔10 min轻晃反应管,避免磁珠沉淀,使磁珠与细胞充分反应,尽量防止出现气泡。阴性分选采用步骤5-7,阳性分选采用步骤8-9。

    阴性分选步骤

    5)应用磁分离器分离5-8 min,收集未被免疫磁珠结合的细胞悬液至另一干净管中。

    6)加入1 mL磁珠分选缓冲液重悬磁珠,用玻璃滴管或移液枪枪头反复吹打磁珠。

    7)重复步骤5,合并两次收集的细胞悬液,可将细胞悬液再次置于磁分离器中分离5-8 min,可明显增加靶细胞纯度。

    阳性分选步骤

    8)应用磁分离器分离5-8 min,去除未与磁珠结合的细胞。
    9)结合了靶细胞的免疫磁珠用1 mL磁珠分选缓冲液洗5次(5×1 mL)后,可直接进行流式检测,或置于37培养48 hrs可使细胞与磁珠分离。