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400-6111-883
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400-6111-883
MTT Cell Proliferation Assay Kit MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒
产品货号:40206ES76
产品规格:500 T
产品价格:¥229.00
类别:细胞增殖与毒性

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    MTT Cell Proliferation Assay Kit

    MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

    40206ES76

    500 T

    229.00

    40206ES80

    1000 T

    419.00

    40206ES90

    5000 T

    1759.00


    产品描述

    噻唑兰(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT),也称作溴化噻唑蓝四氮唑,是一种黄色染料,已经普遍替代传统的台盼蓝染色法或者放射性同位素插入法,用来检测细胞的活力,细胞增殖以及细胞毒性分析。检测原理在于:MTT是一种可接受氢离子的化合物染料,带正电荷,具有细胞膜渗透性。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源进入的MTT还原成为水不溶性的深蓝色MTT-甲臜结晶,而死细胞不具有此功能。甲臜结晶是不能穿透细胞膜,因此沉积在处于增殖且未受损伤的细胞内。甲臜结晶可用DMSO或者酸化的异丙醇溶解出来,酶标仪下测定570 nm的吸光度反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量与活细胞数目成正比,用以评估细胞存活状况。

    本试剂盒以MTT(高纯度)作为指示剂,在经典操作步骤的基础上,采用独特的甲臜溶解液配方,可以直接溶解甲臜沉淀,无需去除原有的培养液。从而避免因去除培养液时甲臜被部分去除而引起的操作误差。具有本底低,灵敏度高,线性范围宽,操作简单等特点。另外,本试剂盒还提供配套的一次性针头过滤器和注射器,为实验带来更多的便利。


    产品组分

    编号

    组分

    产品编号/规格

    40206ES76500T

    40206ES801000T

    40206ES905000T

    40206-A

    MTT粉末

    25 mg

    50 mg

    250 mg

    40206-B

    MTT溶剂

    5 mL

    10 mL

    50 mL

    40206-C

    甲臜溶解液

    50 mL

    100 mL

    100 mL×5

    40206-D

    除菌套装

    1

    1

    1


    运输和保存方法

    冰袋运输。

    收到产品后,取出除菌套装室温保存,其他组分4℃保存。甲臜溶解液也可以放到室温保存。一年有效。


    注意事项

    1)甲臜溶解液具有腐蚀性和毒性,使用时注意防护。

    2MTT有致癌性,应小心操作;MTT溶液需要无菌,因其对菌很敏感。MTT溶液不可4℃保存超过1周,因其可能发生降解,导致检测结果错误。

    3MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT吸光度最好在0-0.7范围内。

    4)使用微孔板进行检测,如果细胞培养时间比较长,需要注意蒸发的问题。一般情况,由于96孔板周围一圈最容易蒸发,建议弃用周围一圈的方法,改加PBS,水或者细胞培养液等。也可通过将96孔板放在靠近培养箱内水源的位置,以减缓蒸发现象。

    5)甲臜溶解液低温或者常温保存可能会产生沉淀,只需37℃水浴使其充分溶解,混匀后即可使用。

    6)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

     

    使用方法(以96孔板为例)

    细胞生长的培养条件会影响检测效果,因此进行MTT检测时需考虑这些条件,包括:培养时间,传代次数以及生长培养基的成分等。一般情况,48-72 h培养时间下,最初铺板的细胞密度可控制在5×103~5×104/100 μL。也可根据细胞大小,增殖速度的快慢来优化最初的细胞铺板密度以及培养时间。

    注意:1)最终检测的培养液内含有酚红会严重影响检测结果。推荐MTT检测时细胞培养在无酚红环境下。也可以在进行MTT孵育的时候改用无酚红培养液。2)每次实验都要设置空白对照孔(不含细胞)。对于细胞毒性试验,还要设置未经药物处理的细胞孔,此对照孔的吸光度范围一般控制在0.75-1.25之间;每个样品孔建议做三个平行。

    A.实验前试剂准备

    1. MTT溶液

    5 mL MTT溶剂直接溶解25mg MTT粉末配制成5 mg/mL的工作液,用试剂盒内提供的除菌套装以除去溶液中的细菌,该溶液可4 避光短时间保存(越短越好)。建议溶解后,直接将剩余液体小剂量分装放到-20℃保存,避免反复冻融,6个月稳定。

    2 甲臜溶解液(MTT终止液)

    甲臜溶解液低温或者常温保存可能会产生沉淀,只需37℃水浴使其充分溶解,混匀后即可使用。

    BMTT细胞增殖检测

    1)接种细胞:用含10%胎牛血清(FBS)的培养液配制成单个细胞悬液,调整细胞密度,以每孔5×103~5×104个细胞接种到96孔板,每孔体积100 µL,培养板的边缘孔用无菌PBS,水或者培养液填充。设置空白对照孔(不含有细胞)。

    237℃,5% CO2,培养24-72 h

    3)可选:对于贴壁细胞,去除旧的培养液,更换100 µL/孔新鲜的培养液(不含酚红);对于悬浮细胞,离心96孔板,去除尽可能多的上清液。然后加入100 µL/孔新鲜的培养液(不含酚红)重悬细胞;

    4)每孔加入10 µL MTT工作液(5 mg/mL),加样时尽量勤换枪头,控制加量误差。

    5)水平摇床上低速混匀1 min后,放入37℃培养箱孵育4h注:对于高密度的细胞(>100,000 cells/)可缩短孵育时间至2 h

    6)对于贴壁细胞,直接吸掉旧的培养液,避免枪尖刮破单细胞层。对于悬浮细胞,离心收集细胞,去除培养液。

    7)加入100 µL/孔甲臜溶解液,用枪充分混匀后放入37℃培养箱孵育4 h注:更长的孵育时间会降低检测灵敏度。

    8)孵育结束,放置在酶标仪上摇匀后,选择570 nm,测定吸光度。记录结果,比色以空白调零。如果无570 nm滤光片,可以使用560-600 nm滤光片。

    注:对于细胞毒性检测,以未经药物处理细胞的OD值为100%,然后计算药物处理细胞所占的比率(x),公式如下:OD(未处理细胞)/OD(药物处理细胞)=100%/x。然后建立直方图。

     

    HB181204