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400-6111-883
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400-6111-883
Endotoxin Removal Kit 内毒素去除试剂盒
产品货号:60404ES03
产品规格:1Kit
产品价格:¥
类别:检测试剂盒

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

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    价格(元)

    Endotoxin Removal Kit 内毒素去除试剂盒

    60404ES03

    1Kit

    4℃

    1680.00


    产品描述

    细菌内毒素可引起机体免疫功能受损,严重者可引发脓毒性休克,急性呼吸窘迫综合症,弥散性血管内凝血,全身炎症反应综合症或致命性多器官功能衰竭等。因此对于用于疾病治疗的基因药物、蛋白药物、单抗克隆药物、治疗性疫苗、小分子化学药物等生物制品必须通过一定的方法去除内毒素。

    翊圣提供的内毒素去除树脂以修饰过的多粘菌素B(PMB)为配体,可高效特异的将生物制品中内毒素去除,经纯化样品最终的内毒素水平可<0.1EU/ml,适合于蛋白,多肽,抗体,多糖等多种形式样品的纯化。本品以预装柱的形式提供,另附带用于去除内毒素的其他试剂(如相关缓冲液)以及无热源耗材等,方便客户使用。


    产品性质

    基质(Matrix)

    4%琼脂糖微球

    配体(Ligand)

    修饰的多粘菌素B(PMB)

    孔径(Bead size)

    90µm

    载量(Capacity)

    >2,000,000 EU/ml树脂

    pH稳定范围(pH range)

    pH5-10

    离子范围(Ion Range)

    0.1-0.5M NaCl

    平衡缓冲液(Equilibration Buffer)

    PBS,pH8.0

    耐受试剂(tolerant reagent)

    20% DMSO, 20%乙醇, 20%甘油; 0.05%吐温-20,10 mM DTT; 1 M尿素;300 mM咪唑等


    产品组分

    组分编号

    组分名称

    规格

    60404-A

    Endotoxin Removal Resin内毒素去除树脂

    1.5ml

    60404-B

    Regeneration Buffer 再生缓冲液

    125ml

    60404-C

    Equilibration Buffer平衡缓冲液

    125ml

    60404-D

    Flow Rate Controller 流速控制器

    1个

    60404-E

    Pyrogen-free Tubes无热源接收管

    1包(3个/包)

    60404-F

    Pyrogen-free Tips无热源吸头(1ml)

    2包(6个/包)


    运输和保存方法

    冰袋运输。4℃保存,有效期至少1年。


    注意事项

    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


    使用方法

    1. 样品处理:多粘菌素B和内毒素是通过静电作用,离子作用,亲水作用和分子间相互作用等多种因素共同作用的结果,因此实验中存在的若干因素都可能会影响内毒素去除效率,如:缓冲液的pH值,内毒素浓度,内毒素与树脂的接触时间,离子强度,温度以及样品的特性等。其中样品pH值和离子强度对于内毒素的去除效率影响尤其重要,纯化前可用处理过的氯化钠,0.1M的NaOH或0.1M HCl来调节离子强度或pH值。
    【注】:① 虽然结合内毒素的pH范围在5-10,但是7-8的pH范围是纯化的最佳范围。 
                  ② 合适的离子浓度可降低非特异性吸附,保持0.15-0.5M NaCl的条件可以得到一个较好的去除效果。
    2. 活化树脂:将预装柱置于铁架台,垂直固定,去除顶部盖子,打开流速控制器,使保护液在重力作用下流干,加入5ml再生缓冲液,调节流速控制器,保持流速在0.25ml/min(或10滴/min),待再生缓冲液流干后再加入5ml再生缓冲液,再重复操作2次,确保体系保持无热源(即内毒素)存在。即使是第一次使用也必须进行这一步操作。该步操作大约需要60min完成。
    3. 平衡树脂:活化完毕后加入6ml的平衡缓冲液,调节流速控制器,保持流速在0.5ml/min,流干平衡缓冲液,再按此操作重复2次。这步操作大约需要40min完成。4. 内毒素去除:将流速控制器关闭,使用无热源枪头将样品加入,打开控制器,控制流速不高于0.25ml/min,流出液体积达到1.5ml后,使用无热源接收管接收样品,样品流干后,再加入1.5ml-3.0ml的平衡缓冲液淋洗,收集淋洗液。检测样品浓度及内毒素水平。
    5. 再次使用:如果流出样品内毒素水平未能达到预期值,需要将预装柱按照步骤2重新再生,然后上样纯化。
    6. 保存条件:如果预装柱用完后需要保存,先用10ml平衡缓冲液平衡柱子,待平衡液流干,加入1.5ml的再生缓冲液(含0.02%的叠氮化钠)。

     

    附表 问题与解答

    问题

    可能原因

    解决方法

    去除效率低

    样品与树脂接触时间太短

    降低样品流速,或通过低温孵育来提高结合效率

    样品的pH值没有在7-8之间

    调节pH值至7-8

    去除或检测系统受到外来因素污染

    使用无热源的实验仪器,保证体系不受污染

    内毒素与目的蛋白结合太牢固

     优化样品的pH值,使它们解离;

    ② 增加样品与树脂的接触时间

    样品损失高

    样品通过非特异性作用结合在树脂上

    增加样品和平衡缓冲液中NaCl的含量

    目的蛋白与内毒素结合牢固,一起结合在树脂上

    ① 优化样品的pH值,使它们解离;

    ② 增加样品与树脂的接触时间

    样品被污染

    树脂用于处理过其他的样品

    尽量避免使用同一个预装柱处理不同样品。如果无法避免,可以在处理一个样品之后,用10-20ml 2M NaCl淋洗树脂,然后再处理另外一种样品


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