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Hieff Trans™ Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent Hieff Trans™悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂
产品货号:40805ES02
产品规格:0.5 mL
产品价格:¥598.00
类别:细胞转染

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  • HB170809


    产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    储存

    价格(元)

    促销价(元)

    Hieff TransTM Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent

    Hieff TransTM悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂

    40805ES02

    0.5 mL

    4℃

    948.00

    598.00

    40805ES03

    1.0 mL

    4℃

    1678.00

    998.00

    40805ES08

    5×1 mL

    4℃

    5268.00

    3698.00


    产品描述

    Hieff TransTM悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂是一种阳离子脂质体转染试剂,经优化专门用于悬浮细胞的转染,且适用于DNA、RNA和寡核苷酸的转染,对大多数真核细胞具有很高的转染效率。

    Hieff TransTM悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂以无菌的液体形式提供。


    运输与保存方法

    冰袋(wet ice)运输。产品4ºC保存,一年有效。不可冷冻!


    注意事项

    1.
    为得到最优的转染效率,请先用无血清培养基(如OPTI-MEM培养基)稀释Hieff TransTM Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent(以下简称Hieff TransTM),之后与DNA或RNA做混合。
    2. 使用高质量的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率,务必确保质粒的高纯度和无菌状态,彻底去除质粒提取过程中可能残留的苯酚和高盐,因为上述酚类会对细胞造成损失,而高盐分会干扰“Hieff TransTM-复合物”的形成。质粒中的内毒素也是转染的大敌,务必去除。

    3. 转染时培养基中不能添加抗生素。

    4. 阳离子脂质体应该在4℃保存,要注意避免多次反复长时间开盖,因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。

    5. 需优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。DNA和Hieff TransTM的比例,通常推荐是1:2 或1:3。

     

    推荐转染条件(以293悬浮培养细胞,质粒DNA转染为例)

    最终转染体积:30 mL

    转染细胞数目:3×107 cell(最终细胞密度:1×106  cell/mL),转染之前需要确保细胞健康,细胞活力>90%。

    质粒DNA量:20–40 μg (typically use 30 μg)

    转染试剂量:40–80 μL (typically use 60 μL). Use 2 μL Hieff TransTM per 1 μg of plasmid DNA transfected.


    操作步骤
    (293悬浮细胞)

    使用以下步骤在30 mL总体系内转染293细胞,转染过程中生长培养基内不要添加抗生素,否则会降低转染效率。转染过程请同时设置阳性对照组和阴性对照组(无DNA,无Hieff TransTM)。

    注:对于其他的培养总体系,按比例放大或者缩小各组分用量。
    1. 转染当天,在配制复合物之前,准备转染需要的细胞量【见上推荐转染条件,即28 mL 生长培养基内加入3×107 cell,台盼蓝排斥法确定细胞活力和小量细胞成团量。剧烈漩涡混匀45 s以打破细胞团,并用计数器测定总细胞量。细胞活力需>90%。】
    注:为了达到最优效率,确保单细胞悬液。

    2. 按照以下方法配制Hieff TransTM-DNA复合物,
    a, 用无血清培养基(如OPTI-MEM I)稀释30 μg质粒DNA,使其终体积为1 mL;
    b, 用无血清培养基(如OPTI-MEM I)稀释60 μL Hieff TransTM,使其终体积为1 mL;轻轻混匀,于室温孵育5 min;
    注意:过长时间孵育会降低效率。
    c, 孵育5min之后,将稀释的质粒DNA加入稀释的Hieff TransTM,使其总体积为2mL。轻轻混匀。
    d, 室温孵育20-30 min,使得DNA-Hieff TransTM复合物形成。此时溶液可能会混浊,但不会影响转染。
    注意:DNA-脂质体复合物室温至少稳定保存5 h。
    3. 孵育完全后,将2mL DNA-Hieff TransTM复合物加入28mL 含293悬浮细胞的生长培养基内,使得细胞最终的密度约为1×106 cell/mL。对于阴性对照,用2mL无血清培养基(如OPTI-MEM I)替换。
    4. 37,8% CO2轨道摇床培养,转速125 rpm,直至进行转基因表达分析,无需去掉复合物或更换培养基。然而,可能有必要在4-6 h后更换生长培养基,不会降低转染活性。