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400-6111-883
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400-6111-883
rTEV Protease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶
产品货号:20403ES80
产品规格:1000 U
产品价格:¥986.00
类别:蛋白酶

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    储存

    价格(元)

    rTEV Protease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶

    20403ES80

    1000 U

    ≤-20℃

    986.00

    rTEV Protease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶

    20403ES92

    10×1000 U

    ≤-20℃

    7856.00

    rTEV Protease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶

    20403ES10

    10 KU

    ≤-20℃

    6756.00

    rTEV Protease重组烟草蚀纹病毒蛋白酶

    20403ES50

    50 KU

    ≤-20℃

    27556.00


    产品描述

    重组型TEV蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅保持天然TEV酶的功能活性,且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性,严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S),切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为:Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0,30℃时可达到最佳活性,但在pH 6.0-8.5和温度4-30℃的广泛范围内皆有活性(见表1),使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rTEV切割后也能利用其N端的6×His标签,通过Ni-NTA树脂去除,以达到纯化目的蛋白的目的。

    表1. 不同温度下rTEV酶切活性

    反应时间(h)

    不同温度下剪切活性(%)

    4℃

    16℃

    21℃

    30℃

    1

    34

    58

    56

    70

    2

    58

    80

    78

    90

    3

    71

    99

    99

    99

    3.5

    84

    99

    99

    99


    产品性质

    来源(Source)

    大肠杆菌

    外观(Appearance)

    无色透明液体

    比活力(Specific Activity)

    5 U/μL

    活性定义(Unit Definition)

    在1×rTEV Buffer(50 mM Tris,pH 8.0,0.5 mM EDTA,1 mM DTT)中,30℃反应1 h,剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。

    纯化(Purification)

    Ni柱亲和纯化

    纯度(Purity)

    ≥95%(by SDS-PAGE)


    产品组分


    编号

    组分名称

    产品货号/规格

    20403ES80/1000U

    20403ES92/10×1000U

    20403ES10/10KU

    20403ES50/50KU

    20403-A

    rTEV Protease(5 U/μL)

    200 μL

    10×200 μL

    2×1 mL

    10 mL

    20403-B

    rTEV Buffer 1(20×)

    2 mL

    10×2 mL

    20 mL

    100 mL

    20403-C

    rTEV Buffer 2(1000×)

    50 μL

    10×50 μL

    500 μL

    2.5 mL


    运输与保存方法

    冰袋运输。

    rTEV Buffer 1、rTEV Buffer 2于-20℃保存,一年稳定。rTEV Protease,-20℃保存,6个月稳定;-70℃长期保存,一年稳定。建议收到货或者第一次使用时分装各组分保存,避免反复冻融。尤其是rTEV Protease,以及rTEV Buffer 2(1000×)。


    应用实例

    1. 取适量rTEV Buffer 2(1000×)作10倍稀释至rTEV Buffer 2(100×)。

    2. 在EP管中配制如下反应体系。

    组分

    用量

    融合蛋白

    20 μg

    rTEV Protease (5 U/μL)

    2-4 μL

    rTEV buffer 1(20×)

    7.5 μL

    rTEV Buffer 2(100×)a

    1.5 μL

    DDW(超纯水)

    up to 150 μL

    3. 30℃孵育,在1、2、4、6小时分别吸出30 μL上述反应液,置于单独的EP管中。

    4. 向上述EP管中加入30 μL 2×SDS Loading Buffer,置于-20℃。
    5. 样品全部反应完毕后,样品煮沸5 min,取40 μL进行SDS-PAGE分析。确定最佳反应时间。如融合蛋白要求低温处理,可将反应液置于4℃,延长反应时间,并增加rTEV酶用量,以保证酶切效果。


    注意事项

    1. 影响天然TEV酶活性的常见因素:1)PMSF和AEBSF(1 mM),TLCK(1 mM),Bestatin(1 mg/mL),EDTA(1 mM),Pestatin A(1 mM)以及E-64(3 mg/mL),而rTEV可兼容上述抑制剂;2)Zn离子浓度(>5 mM),同样对rTEV活性有抑制;3)与半胱氨酸反应的试剂,也是rTEV的潜在抑制剂。
    2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


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