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400-6111-883
Dispase II 分散酶II
产品货号:40104ES60
产品规格:100 mg
产品价格:¥768.00
类别:动物细胞培养

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  • 产品信息


    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Dispase II分散酶II

    40104ES60

    100 mg

    768.00

    Dispase II分散酶II

    40104ES80

    1g

    1675.00


    产品描述

    Dispase II,中文名分散酶II,一种非特异性金属蛋白酶,细胞生物学中常用于从不同的组织或器官分离单细胞,并用于后续细胞培养,如原代细胞的分离,细胞传代等。另外,Dispase II还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。与其他细胞生物学常用蛋白酶(如胰蛋白酶、胶原酶、链霉蛋白酶等)相比,该酶具有以下优势:1)一种快速有效且温和的细胞消化酶,对细胞损伤小,且能维持细胞膜完整性;2)来源于细菌,无支原体或其他动物病毒污染;3)稳定性强,不受温度、pH及血清组分的影响;4)可用于多种类型组织和细胞的分离等。

    本品非无菌Dispase II,来源于Bacillus polymyxa,使用时需对其除菌处理,用于细胞培养时常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。


    产品性质

    比活性(Specific Activity

    ≥0.8U/mg   (+37°C, casein as substrate, pH 7.5)

    单位定义(Unit Definition

    在温度37℃、pH值为7.5的条件下,每分钟水解酪蛋白释放出相当于1µM(181µg)酪氨酸的福林阳性氨基酸和肽所需要的酶量,即为一个蛋白酶活性单位,以U表示。

    最佳pHpH Optimum

    6.0-8.5

    抑制剂(Inhibitors

    EDTA,   EGTA, Hg2+, 其他金属离子。血清不会抑制dispase活性。

    激活剂(Activator

    Ca2+,Mg2+,Mn2+,Fe2+,Fe3+,Al3+。最佳的Ca2+浓度为2 mM。本酶制品已含足量的Ca2+使其处于最佳活性。


    运输和保存方法

    冰袋运输。

    冻干粉4℃保存。储存液于4℃可稳定保存2周,若长期保存,请分装后于-20℃冻存。避免反复冻融。


    注意事项

    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


    母液及工作液配制

    1)用Hepe缓冲盐溶液(50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl)溶解适量本品冻干粉,配制成10 mg/mL的储存液,用0.22 µM滤膜过滤除菌。

    2)使用时用适当细胞培养液将上述储存液稀释到工作液浓度即可,用于细胞分离时其常用工作浓度为
    0.6-2.4 U/mL。【注】:不推荐使用高于2.4U/mL的工作浓度。

    使用方法

    组织的解离

    1)用无菌的小刀或者剪刀将组织剪成合适大小的组织块;

    2)用无菌PBS清洗组织块;

    3)向上述组织块中加入Dispase II溶液(工作浓度为0.6-2.4 U/mL),并确保组织块全部浸没于Dispase 溶液中。

    4)37℃孵育,孵育过程缓慢搅拌直至组织块全部解离。【注】:若第一次使用该酶,可通过细胞计数来确定需要的总孵育时间。一般对于较难解离组织,1h即可达到分离目的,但更长时间(如数小时)的孵育也不会明显影响细胞活性。

    5)如有需要,可将上述消化产物通过无菌不锈钢网筛过滤,以分开单细胞与残留的组织块。或者待大块组织沉淀后轻轻倒出上层细胞,若是需要,换用新鲜dispase溶液以进一步解离残留组织。

    6)离心沉淀细胞,倒掉酶溶液;

    7)用培养基重悬细胞沉淀,并于常规条件下培养细胞。

    细胞传代

    1)利用Dispase 溶液(37℃预热)浸没细胞,于37℃孵育5 min;

    2)吸除上述溶液,继续于37℃孵育10 min;

    3)显微镜下观察细胞分离情况,如需要,可进一步孵育15 min;

    4)利用细胞培养基悬浮细胞,轻轻旋转使得细胞沉淀并用培养基清洗细胞;

    5)换用新鲜细胞培养液重悬细胞,并按常规方法进行细胞铺板。


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