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400-6111-883
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400-6111-883
Phleomycin (20 mg/mL in solution) 腐草霉素
产品货号:60217ES20
产品规格:20 mg
产品价格:¥868.00
类别:抗生素

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Phleomycin (20 mg/mL in solution) 腐草霉素

    60217ES20

    20 mg

    868.00

    Phleomycin (20 mg/mL in solution) 腐草霉素

    60217ES60

    5×20 mg

    3268.00


    产品描述

    Phleomycin,中文名腐草霉素,由Streptomyces verticillus(轮枝链霉菌)的突变株产生的一种糖肽抗生素,属于博来霉素(bleomycin)家族。抑菌机制在于腐草霉素可结合并插入DNA,从而破坏其双螺旋结构的完整性。腐草霉素对大多数细菌、真菌、酵母、植物细胞和哺乳动物细胞都有活性,尤其适用于对Zeocin敏感性低的细胞,如酵母菌和丝状真菌。

    腐草霉素是分子遗传学研究中的选择性抗生素之一,可用于筛选携带Sh ble基因的转染细胞。Sh ble基因来源于Streptoalloteichus hindustanus,其可编码一种14 kDa的蛋白,该蛋白可与腐草霉素强烈结合从而抑制其切割DNA链的活性。腐草霉素是由多种结构类似物构成的复合物,这些复合物仅仅在末端胺基有所差异。另外,因属于铜离子螯合的复合物,溶液呈蓝色。

    本品以20 mg/mL的无菌溶液形式提供,可直接用于细胞培养,在0.1-50 μg/mL浓度范围内,腐草霉素可以抑制大多数好氧细胞的生长。

    产品性质

    CAS号(CAS NO.)

    11006-33-0

    分子式(Formula)

    C55H85O21N20S2Cu•HCl

    分子量(Molecular weight)

    1525 g/mol

    纯度(Purity)

    >90%(HLPC)

    结构式(Structure)

    image.png 


    运输与保存方法

    冰袋运输。4-20保存。4有效期12个月,-20有效期18个月。避免反复冻融。


    注意事项

    1. 腐草霉素对浓酸较为敏感,但可短时间暴露于稀酸中。使用前将本品回温至室温,并轻轻混匀。

    2. 腐草霉素有毒,避免直接接触皮肤,不可吞服。酸性或碱性pH,或次磷酸钠中会即刻失效。

    3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


    操作方法

    【注意事项】:
    1)细胞对腐草霉素的敏感性受pH值影响,如pH值越高,敏感性越高;另外,对于高渗透压培养基如原生质体再生用的培养基,腐草霉素的活性会明显降低2-3倍。因此也可能通过使用低盐培养基来降低腐草霉素使用量。

    2)使用前需将低温存放的腐草霉素置于室温回温,之后低速充分混匀。

    1. 大肠杆菌

    携带bleomycin抗性基因如Sh bleTn5的质粒,一旦转化进入大肠杆菌受体菌如HB101,DH5a,MC1061,赋予其腐草霉素抗性。

    腐草霉素抗性的转化子可以在添加5 μg/mL Phleomycin的低盐LB琼脂培养基(Yeast extract 5 g/L,Tryptone 10 g/L,NaCl 5 g/L,Agar 15 g/L,pH 7.5)中进行筛选。加有腐草霉素的平板可于4稳定保存1个月。

    2. 酵母菌

    酿酒酵母的腐草霉素抗性转化子可在添加10 μg/mL Phleomycin的YEPD培养基中进行筛选。

    操作步骤:按常规方法进行酵母细胞转化,一旦DNA进入细胞后,用YEPD培养基稀释细胞并置于摇床上培养6 h或过夜,使其抗性性状得以表达。之后将细胞冰浴1 h并涂布培养在添加10 μg/mL Phleomycin的YEPD(pH 7.0)固体培养基上。

    3. 真菌

    根据转化子对Phleomycin 的敏感性不同,在添加有10-50 μg/mL腐草霉素的再生培养基内进行筛选。先将细胞在4孵育过夜然后置于生长温度培养,可提高其对抗生素的敏感性。

    4. 植物细胞

    根据植物类型不同,选择5-25 μg/mL Phleomycin进行转化子筛选。

    5. 哺乳动物细胞

    5-50 μg/mL Phleomycin,推荐先通过建立灭杀曲线来确定最佳浓度。与G418做比较,可能需要更长的时间来杀死细胞或者使细胞从平板上脱落,尤其当细胞处于高密度的情况。

    依细胞系不同,通常需要5~21天来挑选具腐草霉素抗性的稳定转染细胞。

     

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