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400-6111-883
Trypsin 1:250 (powder) 胰蛋白酶1:250(粉末)
产品货号:40101ES25
产品规格:25g
产品价格:¥189.00
类别:动物细胞培养

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  • 产品信息

     

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    TRYPSIN,1:250 胰蛋白酶1:250

    40101ES25

    25 g

    189.00


    产品描述

    胰蛋白酶(Trypsin)是一种普遍发现于脊椎动物消化系统的丝氨酸蛋白酶,能水解蛋白,以无活性的胰蛋白酶原(trypsinogen)的形式分泌于胰腺中。其切割肽链的位点主要位于赖氨酸或精氨酸的羧基端(二者紧接脯氨酸的情况除外)。胰蛋白酶包括两个亚基,α亚基(有2个多肽链构成)和β亚基(有1个多肽链构成)。其水解活性可被多种抑制剂抑制,包括:1)有机磷化合物,如氟磷酸异丙酯;2)来源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白酶抑制剂;3)银离子;4)特定蛋白酶抑制剂,如AEBSF、抗蛋白酶、抑肽酶、DFP、亮抑肽酶、PMSFTLCK等;

    本品是来源于猪胰腺的胰蛋白酶冻干粉,经γ射线处理灭活病毒,酶活力> 250 units/mg。广泛用于细胞传代,将贴壁细胞从培养板上消化水解下来制备单细胞悬液,常用的工作浓度是0.25-5%w/v)。


    产品性质

    中文别名(Chinese   synonym

    胰蛋白酶,猪胰脏来源;

    英文别名(English   synonym

    Trypsin, porcine pancreas; Parenzyme;   Tryptar; Trypure; Parenzymol; U-4858;

    CAS号(CAS NO.

    9002-07-7

    分子量(Molecular   weight

    23.8 kDa

    外观(Apperance

    白色至类白色粉末

    消光系数(Extinction   coefficient

    E1%280=14.3

    等电点(Isoelectric   Point

    pH 10.5

    溶解性(Solubility

    溶于水,几乎不溶于乙醇和甘油

    比活力(Specific activity*

    250   U/mg

    *活力定义(Unit definition):The activity   causing a change in absorbance of 0.003/minute at 253 nm.


    运输和保存方法

    冰袋运输。冻干粉4℃保存,保持干燥。


    注意事项

    1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    2)胰蛋白冻干粉产品常遇到的活性定义及其转换,

    1 BAEE U:在25℃,pH 7.6 的条件下,以BAEE为底物,3.2 mL的反应体系中,A253吸光值每分钟会发生0.001的变化即为一个胰蛋白酶酶活单位。

    1 TAME U:在25℃,pH 8.20.001MCa2+的条件下,每分钟水解 1微摩尔TAME 的样品量。

    1 USP U:在指定条件下,每分钟引起吸光值发生0.003的变化的样品活性。

    1 TAME unit = 19.2 USP or NF units = 57.5 BAEE Unit

     

    使用方法(用于贴壁细胞的消化)

    1. 胰酶浓缩液(2.5%)的配置

    称取2.5 g胰酶粉末溶于100 mL HBSS(无钙,镁)缓冲液,并调整pH7.4-7.6范围。此时得到的即2.5%胰酶浓缩液,置于4℃短时间保存,3个月相对稳定。建议分装冻存,利于长期保存。解冻后可能会出现少量沉淀,属于正常现象,不会影响其使用效力。

    【注】冻干粉也可溶于其他不含钙镁离子的平衡盐缓冲液如PBS

    细胞的消化可以直接用胰酶溶液,但通常使用的是胰酶-EDTA溶液,因为EDTA是一种II价金属离子螯合剂,能够螯合钙镁离子,减少细胞间的粘附性,从而增强胰酶的活性。

    2. 胰酶-EDTA溶液的配制:

    Ca2+Mg2+及酚红的平衡盐溶液

    485 mL

    胰蛋白酶

    10 mL (typically a 2.5% w/v solution)

    EDTA

    5 mL of a 2% w/v solution

    3. 贴壁细胞的消化

    方法一

    1)移除培养板中的培养液,用不含Ca2+Mg2+的缓冲液清洗单层贴壁细胞,直至清除残余血清,吸除盐溶液。

    2)向上述贴壁细胞中加入适量胰蛋白酶-EDTA溶液,至完全覆盖细胞即可。

    3)倾斜培养板,吸取胰酶-EDTA溶液,反复吹洗细胞数次,注意消化时间不可过长。

    【注】消化时间跟细胞类型、细胞密度、所用血清浓度、胰酶活性、以及消化前细胞培养时间有关。

    4)将细胞于室温孵育直至细胞分离,期间可将细胞培养板置于显微镜下观察,避免细胞过度消化,从而避免胰酶对细胞造成的损伤。

    5)加入10 mL细胞培养液,轻轻反复吹吸从而将细胞从培养板底尽可能吹离,吹洗时尽量避免气泡的产生。

    6)进行下一步操作或将细胞冻存。

    操作时务必小心谨慎,同时时刻注意避免交叉污染发生的可能性。

    方法二

    25cm2 T-Flask为例,

    1)无菌条件下吸除培养瓶中培养液。

    2)加入3 mL冰的胰蛋白酶-EDTA溶液(配方同上)。

    3)孵育30 s(或更长,如果需要)。置于低倍镜观察,如果有部分细胞开始变圆脱离培养瓶壁,此时可吸除胰酶溶液,继续孵育至细胞完全脱落。

    4)加入10 mL新鲜MEM培养液,可用枪快速的将培养液加入,有助于使细胞脱落;然后使用相同的枪头,轻轻地多次吹洗细胞并混匀后,吸取其中5 mL于一个新的培养瓶中。

    5)置培养条件下孵育。

     

    HB181203