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Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐
产品货号:60210ES25
产品规格:25 mg
产品价格:¥356.00
类别:抗生素

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    促销价(元)

    Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐

    60210ES25

    25 mg

    678.00

    356.00

    Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐

    60210ES60

    100 mg

    2028.00

    1356.00

    Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐

    60210ES72

    250 mg

    4478.00

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    Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐

    60210ES80

    1 g

    15192.00

    8326.00


    产品描述

    嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑链霉菌(Streptomyces alboniger)发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌,各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3´末端的类似物,能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后,不会参与随后的任何反应,从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

       嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(PAC),赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。

    嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关,现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下,嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。

    产品性质

    CAS号(CAS NO.)

    58-58-2

    分子式(Formula)

    C22H29N7O5·2HCl

    分子量(Molecular weight)

    544.43 g/mol

    纯度(Purity, HPLC)

    >98%

    外观(Appearance)

    白色至米白色粉末

    结构式(Structure)

    image.png 


    运输和保存方法

    冰袋运输。-20干燥保存,2年有效。

     

    使用方法

    1. 建议使用浓度

    哺乳动物细胞:1-10 μg/mL,最佳浓度需要杀灭曲线来确定

    大肠杆菌:LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌,使用浓度为125 μg/mL。

    使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节,而且受宿主细胞本身的影响。

    2. 溶解方法

    用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/mL的母液,经0.22 μm滤膜过滤除菌后分装于-20冻存;也可溶于甲醇,配制成10 mg/mL的储存液。

    3. 嘌呤霉素杀灭曲线的确定(以shRNA转染或者慢病毒转导为例)

    嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株,确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线(kill curve)。

    1)Day 1:24孔板内5~8×104 cells/孔的密度铺板,铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。37细胞孵育过夜
    2)Day 2:准备筛选培养基:含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0-15 μg/mL,至少5个梯度);往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基;之后37孵育细胞

    3)Day 4:更换新鲜的筛选培养基,并观察细胞存活率。

    4)根据细胞的生长状态,约2-3天更换新鲜的筛选培养基
    5)每日监测细胞,观察存活细胞率,从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或所有非转导细胞的药物最低浓度。

    4. 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选

    等转染含有pac基因的质粒后,细胞在含有嘌呤霉素的培养基中增殖,以筛选出稳定转染子。

    1)细胞转染48 h后,将细胞(原样或稀释)置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。
    】:当细胞处于分裂活跃期时,抗生素作用最明显。细胞过于密集,抗生素产生的效力会明显下降。最好进行细胞分盘使其密度不超过25%。

    2)每隔2-3天,移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。

    3)筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间,这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。

    每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要48 h,有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3-10天。
    4)转移和放置5-10个抗性克隆到一个35 mm的培养皿中,用选择培养基继续培养7天。此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。


    注意事项

    1)嘌呤霉素为有毒化合物,操作时请小心拿放 

    2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

     

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