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5× Hieff Canace™ PCR Master Mix (for Multiplex PCR)
产品货号:10137ES03
产品规格:1 mL
产品价格:¥1215.00
类别:高保真PCR

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

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    价格(元)

    5× Hieff Canace® PCR Master Mix (for Multiplex PCR)

    10137ES03

    1 mL

    -20

    1215.00

    5× Hieff Canace® PCR Master Mix (for Multiplex PCR)

    10137ES08

    5×1 mL

    -20

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    25×1 mL

    -20

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    5× Hieff Canace® PCR Master Mix (for Multiplex PCR)

    10137ES76

    500 mL

    -20

    178655.00


    产品描述

    5× Hieff Canace® PCR Master Mix (for Multiplex PCR)是基于新一代高保真DNA聚合酶Canace开发的,针对于高通量测序领域中多重PCR文库构建应用专门优化的Canace酶基于Pyrococcus furiosis DNA Polymerase,经基因工程改造而成。其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和经过改造的3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性,保真性。耐热温度达到98℃,保真性是Taq DNA聚合酶的52倍,普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了独特的延伸因子,扩增速度达到15 sec/kb。本产品5×mix PCR混合液,可添加的模板、引物体积范围更大,使您的实验更加灵活(本公司另有2×mix可供选择,Cat.10138)


    产品组分

    组分

                                       产品编码/规格

    10137ES03

    10137ES08

    10137ES25

    10137ES76

    5× Hieff Canace® PCR Master Mix (for Multiplex PCR)

    1 mL

    5×1 mL

    25×1 mL

    500 mL



    产品应用

    多重PCR文库构建。


    质量控制

    核酸外切酶残留检测:50 μL反应体系,本品和1 μg λDNA -HindIII,37下孵育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

    核酸内切酶残留检测:50 μL反应体系,本品和1 μg λDNA,37温育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

    大肠杆菌残留DNA检测: 50 μL体系中,加入本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。


    运输与保存方法

    冰袋运输。-20保存。有效期2年。


    注意事项

    1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

    2. 值得注意的是,多重PCR建库实验本身具有一定的难度,通常需要进行优化,如您在使用本产品时遇到困难,可联系我们的技术支持,我们有多重优化方案,可帮助您更好的构建实验体系。


    PCR反应体系(推荐冰上配制)

    组分

    体积 μL

    ddH2O

    to 50

    DNA模板

    X

    Primer mix (X μM)

    X

    5× Hieff Canace® PCR Master Mix (for Multiplex PCR)

    10

    注:

    1) 试剂使用:使用前要充分解冻混匀。

    2) 引物与模板NGS建库领域中通过多重PCR进行target enrichment,其中的引物和模板条件需要自行摸索

    3) GC模板:在体系中加入终浓度为5%的DMSO可有利于扩增GC含量大于60%的模板


    PCR扩增程序

    循环步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性

    98

    0.5-3 min

    1

    变性

    98

    10 sec

    25-35(可自行优化)

    退火

    60

    20 sec

    延伸

    72

    15-30 sec/kb

    终延伸

    72

    5 min

    1

    1预变性温度和时间:推荐使用98。预变性推荐时间:质粒DNA等简单模板为30 sec;cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min;高GC含量模板为5-10 min。

    2退火温度和时间:推荐使用60,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。


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