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2× Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真酶预混液
产品货号:10136ES01
产品规格:100 μL
产品价格:¥86.00
类别:高保真PCR

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    储存

    价格(元)

    2× Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真酶预混液

    10136ES01

    100 μL

    -20

    86.00

    2× Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真酶预混液

    10136ES03

    1 mL

    -20

    526.00

    2× Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真酶预混液

    10136ES08

    5×1 mL

    -20

    1426.00

    2× Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真酶预混液

    10136ES25

    25×1 mL

    -20

    5626.00


    产品描述

    2× Hieff Canace® PCR Master Mix是即用型2×预混合溶液,包含Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase,dNTP以及优化的缓冲体系。Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶,具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性,其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍,是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。扩增速度可达15 sec/kb。适用于复杂模板的扩增,扩增产物为平末端。

    2× Hieff Canace® PCR Master Mix具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,反应体系只需加入引物和模板即可进行扩增,简化了实验操作步骤,减少了人为误差,提高了实验通量和结果的重复性。本产品中不含染料,PCR产物需加入Loading buffer 后进行电泳。另外,该产品还含有特异保护剂,使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。


    产品应用

    基因克隆;复杂DNA模板扩增;高通量建库。


    质量控制

    核酸外切酶残留检测:20 μL本品和0.6 μg λDNA -Hind Ⅲ,37下孵育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

    核酸内切酶残留检测:20 μL本品和1 μg λDNA,37温育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

    大肠杆菌残留DNA检测50 μL体系中,加入25 μL本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。


    运输与保存方法

    冰袋运输。-20保存。有效期2年。


    注意事项

    为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

    推荐PCR反应体系(冰上配制)

    组分

    体积

    终浓度

    ddH2O

    to 50 μL

    -

    DNA模板

    适量

    -

    Primer正向 (10 μM)

    2.5 μL

    0.5 μM

    Primer反向 (10 μM)

    2.5 μL

    0.5 μM

    2× Hieff Canace® PCR Master Mix

    25 μL

    注: 
    1)聚合酶终浓度1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶

    2)引物PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM,推荐0.5 μM

    3)Mg2+dNTP终浓度1×预混液含有1.5 mM Mg2+200 μMdNTP

    4)GC模板:在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。

    5)不同模板的推荐使用量(50 μL反应体系):

    模板种类

    扩增片段1 kb-20 kb

    基因组DNA

    50 ng-200 ng

    质粒或病毒DNA

    10 pg-20 ng

    cDNA

    1-5 μL (不超过PCR反应总体积的1/10)


    PCR扩增程序设置

    循环步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性

    98

    0.5-3 min

    1

    变性

    98

    10 sec

    30-35

    退火

    60

    20 sec

    延伸

    72

    15-30 sec/kb

    终延伸

    72

    5 min

    1

    注:

    1预变性温度和时间:推荐使用98。预变性推荐时间:质粒DNA等简单模板为30 sec;cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min;高GC含量模板为5-10 min。

    2退火温度和时间:推荐使用60,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

    3延伸温度和时间:推荐使用72。延伸时间推荐如下:质粒DNA等简单模板为15 sec/kb;cDNA、基因组DNA等复杂模板为30 sec/kb,根据实际情况可延长至40 sec/kb。

    4扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20℃保存,防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端,产物直接用于克隆,请使用平末端连接载体。


    应用实例


    2.png 

    1: Hieff Canace® 高保真PCR预混液扩2.1 kb-6 kb目的片段。所有基因片段均可实现高特异性、高产量扩增。模板:拟南芥基因组DNA,50 ng/50 μL;退火温度:60℃;延伸时间:30 sec/kb。


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