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400-6111-883
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400-6111-883
TRITC Phalloidin 罗丹明标记鬼笔环肽
产品货号:40734ES75
产品规格:300T
产品价格:¥1533.00
类别:荧光探针/细胞染色

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  • HB180502


    产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    外观

    储存

    价格(元)

    TRITC Phalloidin 罗丹明标记鬼笔环肽

    40734ES75

    300T

    液体

    -20℃避光保存

    1533.00

    40734ES80

    1mg

    冻干粉

    -20℃避光保存

    6456.00


    背景描述

    鬼笔环肽(Phalloidin)是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)的环状七肽毒素,以高亲和力(Kd= 20 nM) 选择性结合于丝状肌动蛋白 F-actin,而不会与单体肌动蛋白 G-actin 结合,通常用来标记组织切片,细胞培养物或无细胞体 系中的 F-actin,从而对 F-actin 进行定性和定量分析。另外,鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维,无论是动 植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞,按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可 忽略,染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此,鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白(Actin)抗体进行相关研究。 另外鬼笔环肽衍生物很小,直径约 12-15Å,分子量<2000 Daltons,未标记肌动蛋白(Actin)的许多生理特性都得以维持, 比如,同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白,原肌球蛋白,DNase I 等仍能发生反应;鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球 蛋白基质;以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。

    鬼笔环肽(Phalloidin)的结合阻止丝状肌动蛋白(微丝)的解离,稳定微丝结构,从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态 平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度(CC)降至<1µg/mL,因此,可用作一种聚合促进剂。此外,鬼笔环肽还 可抑制 F-actin 的 ATP 水解活性。

    本品为 TRITC(四甲基异硫氰酸罗丹明)标记的鬼笔环肽,染色反应特异性强,对比性高,具有比 Actin 抗体更好的染 色效果,适合用作 F-actin 的定性和定量检测。另外,经本品结合后的 F-actin 仍能维持 actin 自身具有的许多生物学特性。 且本品的结合没有物种差异性,适用性广泛。

    我司分别提供冻干粉形式(货号:40734ES80)和储存液形式(货号:40734ES75,浓度为 20µM)的 TRITC 标记鬼笔 环肽,用户根据自身需求选择。建议使用浓度为 80~200nM。


    产品性质

    分子式(Molecular Formula)

    C60H70N12O13S2

    分子量(Molecular Weight)

    1231.4

    最大激发/发射波长(Ex/Em)

    540~546/565~575nm

    多肽序列(Sequence)

    TRITC-bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-L   eu)(S-3 to 6)

    外观(Appearance)

    紫色粉末(冻干粉)

    溶解性(Solubility)

    溶于 DMSO、DMF、甲醇或者乙腈水溶液(20%)


    运输与保存方法

    冰袋运输。-20℃避光干燥保存, 1年有效。


    注意事项

    1) 鬼笔环肽具有毒性,需小心操作(对人的半数致死剂量 LD50 约 2mg/kg)。

    2) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。  


    需要自备材料

    1) (可选)甲醇

    2) 1×PBS 缓冲液, pH 7.4, 细胞培养级别(货号:60145ES76)

    3) 固定液 4%多聚甲醛(溶于 PBS 缓冲液)(货号:36314ES60)

    4) 丙酮或透化液 0.5% Triton X-100(溶于 PBS 缓冲液)

    5) Fluoromount-GTM   水溶性封片剂(不含 DAPI)(货号:36307ES08),DAPI(货号:40727ES10)

    6) (可选)DAPI Fluoromount-GTM  水溶性封片剂(含 DAPI)(货号:36307ES08)

    7) (可选)BSA,标准级别(货号:36101ES25)

    8) 载玻片和盖玻片

    9) 盖玻片周围密封液(如透明指甲油)

    10)组装有 TRITC 激发/发射滤片,以及 DAPI 激发/发射滤片的荧光显微镜或共聚焦显微镜。


    操作步骤

    1.工作液准备

    1)对于 TRITC 标记鬼笔环肽(货号:40734ES75,300T)

    本品以溶于甲醇的 20µM 储存液形式提供,总量为 300µL。按照 100 nM 的工作液浓度来换算,可制备总量为 60 mL 的工 作液。建议收到产品后,根据单次使用量,对母液进行小量分装,-20℃避光冻存,一年稳定。

    开始实验前,使用 1×PBS 缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为:80~200nM。工作液现配现用。

    2)对于 TRITC 标记鬼笔环肽(货号:40734ES80,1mg)

    本品以冻干粉形式提供,分子量为 1231.4,总量为 1mg。可先用甲醇或者 DMSO 充分溶解配制成 20~100µM 的储存液。 如,加入 8.1208mL 甲醇到 1mg 鬼笔环肽即得到 100µM 等量的储存液,根据单次使用量,进行小量分装,-20℃避光冻 存,一年稳定。

    开始实验前,使用 1×PBS 缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为:80~200nM。工作液现配现用。

    2.染色步骤

    1)细胞爬片生长 24h,使其密度达到 50%汇合度。

    2)吸掉培养液,37℃预热的 1×PBS(pH 7.4)清洗细胞 2 次。

    3)使用溶于 PBS 的 4%甲醛溶液进行细胞固定,室温固定 10min。

    注:避免固定剂中含有甲醇成分,因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。

    4)室温条件下,用 PBS 清洗细胞 2~3 次,每次 10min。

    5)室温条件下,用丙酮(≤-20℃)脱水或者用 0.5% Triton X-100 溶液透化处理 5min。

    6)室温条件下,用 PBS 清洗细胞 2~3 次,每次 10min。

    7)取 200µl 配制好的 TRITC 标记鬼笔环肽工作液,覆盖住盖玻片上的细胞,室温避光孵育 30min(通常情况下,4℃~37℃ 孵育皆可)。

    注:为了降低背景,可于 TRITC 标记的鬼笔环肽工作液内加入 1% BSA;另外,孵育过程中为了避免溶液挥发,可 将盖玻片转移到一个密封的容器内。

    8)用 PBS 清洗盖玻片 3 次,每次 5min。

    9)使用 200µl DAPI 溶液(浓度:100 nM)对细胞核进行复染,约 30s。

    10)用 PBS 清洗盖玻片,然后倒置在已经滴有一滴 Fluoromount-GTM 水溶性封片剂的载玻片上。使用纸巾轻轻檫掉多余封 片剂,然后用指甲油永久封片。此法制备的标本玻片可置于 4℃避光保存,通常 6 个月内可继续做 F-actin 染色分析。

    注:也可以直接使用含有 DAPI 的抗荧光淬灭封片剂(货号:36308ES11)合并步骤 9)10),简化步骤。

    11)荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察,选择 TRITC 激发/发射滤片(Ex/Em=545/570nm)和 DAPI 激发/发射滤 片(Ex/Em=364/454nm)。