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2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液
产品货号:10149ES01
产品规格:100 μL
产品价格:¥93.00
类别:高保真PCR

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液

    10149ES01

    100 μL

    93.00

    2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液

    10149ES03

    1 mL

    553.00

    2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液

    10149ES08

    5×1 mL

    1453.00


    产品描述

    2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液是即用型2×预混合溶液,包含Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase,dNTP以及优化的缓冲体系。预混液中添加了Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase的热启动因子,极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。预混液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力,扩增目的片段的长度可长达10 kb,该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性,其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍,是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。扩增速度可达15 sec/kb。适用于复杂模板的扩增,扩增产物为平末端。

    2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,反应体系只需加入引物和模板即可,并可以通过两步法的程序进行扩增,简化了实验步骤,节省了时间。本产品中不含染料,PCR产物需加入Loading buffer后进行电泳。另外,该产品还含有特异保护剂,使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。


    产品应用

    基因克隆;复杂DNA模板扩增;高通量建库。


    质量控制

    核酸外切酶残留检测:20 μL本品和0.6 μg λDNA -Hind Ⅲ,37℃下孵育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

    核酸内切酶残留检测:20 μL本品和1 μg λDNA,37℃温育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

    大肠杆菌残留DNA检测:50 μL体系中,加入25 μL本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。


    运输与保存方法

    冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。


    注意事项

    1)解冻后Master Mix可能出现晶体沉淀,使用前务必涡旋振荡混匀至沉淀消失,不影响试剂性能。

    2)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


    推荐PCR反应体系(冰上配制)

    组分

    体积

    终浓度

    ddH2O

    to 50 μL

    -

    DNA模板

    适量

    -

    Primer正向 (10 μM)

    2.5 μL

    0.5 μM

    Primer反向 (10 μM)

    2.5 μL

    0.5 μM

    2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix

    25 μL

    【注】: 1)聚合酶终浓度:在1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶。

          2)引物:PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM,推荐0.5 μM。

          3)Mg2+、dNTP终浓度:在1×预混液含有1.5 mM Mg2+和200 μM的dNTP。

          4)不同模板的推荐使用量(50 μL反应体系):

    模板种类

    扩增片段1 kb-10 kb

    基因组DNA

    50 ng-200 ng

    质粒或病毒DNA

    10 pg-20 ng

    cDNA

    1-5 μL (不超过PCR反应总体积的1/10)

    PCR扩增程序:有以下三种程序可选择,优先选择两步法程序。

    两步法程序(优先推荐):                           

    循环步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性

    98℃

    3 min

    1

    变性

    98℃

    10 sec

    30-35

    延伸

    68℃

    30 sec/kb

    终延伸

    72℃

    5 min

    1

    三步法程序(常规程序):

    循环步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性

    98℃

    3 min

    1

    变性

    98℃

    10 sec

    30-35

    退火

    60℃

    20 sec

    延伸

    72℃

    30 sec/kb

    终延伸

    72℃

    5 min

    1

    梯度温度退火程序(难扩增基因推荐程序):         

    步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性

    98℃

    3 min

    1

    变性

    98℃

    10 sec

    15,每个循环降低1℃

    梯度退火

    70-55℃

    20 sec

    延伸

    72℃

    30 sec/kb

    变性

    98℃

    10 sec

    20

    正常退火

    55℃

    20 sec

    延伸

    72℃

    30 sec/kb

    终延伸

    72℃

    5 min

    1

    【注】:1)预变性温度和时间:推荐温度:98℃,时间:3 min,高GC含量模板5-10 min。

         2)退火温度和时间:推荐温度:60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产         物在胶上呈弥散状。

          3)延伸温度和时间:推荐温度:72℃。时间:30 sec/kb,复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。

          4)扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20℃保存,防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端。

         5)不同扩增程序下的特点:              

    程序类型

    两步法

    三步法

    梯度退火

    速度

    最快

    中等

    特异性

    中等

    PCR产量

    中等

    最高

    中等

    检出率

    中等

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    产品名称

    货号

    规格

    价格(元)

    Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶

    10148ES60/76/80

    100/500/1000 U

    683/2383/4583

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    HB190611