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400-6111-883
Hieff Canace® Gold High Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶
产品货号:10148ES10
产品规格:10 U
产品价格:¥103.00
类别:高保真PCR

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff Canace® Gold High-Fidelity   DNA Polymerase高保真DNA聚合酶

    10148ES10

    10 U

    103.00  

    Hieff Canace® Gold   High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶

    10148ES60

    100 U

    683.00

    Hieff Canace® Gold   High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶

    10148ES76

    500 U

    2383.00

    Hieff Canace® Gold   High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶

    10148ES80

    1000 U

    4583.00


    产品描述

    Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase,经基因工程改造而成。该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性,其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍,是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了热启动因子,极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力,扩增速度达到15 sec/kb,扩增目的片段的长度可长达10 kb。本产品配备了优化缓冲液,添加了PCR增强组分,使得该酶适用于复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。


    产品组分

    编号

    组分

    产品编码/规格

    10148ES10

    (10U)

    10148ES60

    (100U)

    10148ES76

    (500U)

    10148ES80

    (1000U)

    10148-A

    Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA   Polymerase

    (2 U/μL)

    5 μL

    50 μL

    250 μL

    250 μL×2

    10148-B

    2×Canace® Gold PCR buffer(含Mg2+,dNTPs)

    300 μL

    1 mL×3

    1 mL×15

    1 mL×30


    产品应用

    基因克隆;复杂DNA模板扩增;高通量建库。


    活性定义

    用活性化的大马哈鱼精子DNA为模板/引物,74℃,30 min内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1 U。


    质量控制

    核酸外切酶残留检测:20 μL反应体系,10U本品和1 μg λDNA –Hind III,37℃下孵育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

    核酸内切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和1 μg λDNA,37℃温育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

    大肠杆菌残留DNA检测:50 μL体系中,加入2 U本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。


    运输与保存方法

    冰袋运输。-20℃保存,有效期2年。


    注意事项

    为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


    推荐PCR反应体系(冰上配制)

    组分

    体积

    终浓度

    ddH2O

    to 50 μL

    -

    2×Canace®   Gold PCR buffer (含Mg2+,dNTPs)

    25   μL

    DNA模板

    适量

    -

    Primer正向 (10 μM)

    2.5 μL

    0.5 μM

    Primer反向 (10 μM)

    2.5 μL

    0.5 μM

    Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA   Polymerase(2 U/μL)

    0.5 μL

    1 U/50 μL

    【注】:  1)试剂使用:使用前要充分解冻混匀。

         2)聚合酶浓度:推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化,请勿超过2 U/50 μL。

         3)聚合酶添加:为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物,建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。
         4)Mg2+终浓度:体系终浓度为1.5 mM。如有特殊需要,可用50 mM MgCl2,以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。

     5)高GC模板:在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。

         6)不同模板的推荐使用量(50 μL反应体系):

    模板种类

    扩增片段1 kb-10 kb

    基因组DNA

    50ng-200 ng

    质粒或病毒DNA

    10pg-20 ng

    cDNA

    1-5   μL (不超过PCR反应总体积的1/10)


    PCR扩增程序:有以下三种程序可选择,优先选择两步法程序。

    两步法程序(优先推荐):    
                           

    循环步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性

    98℃

    3 min

    1

    变性

    98℃

    10 sec

    30-35

    延伸

    68℃

    30 sec/kb

    终延伸

    72℃

    5 min

    1


    三步法程序(常规程序):

    循环步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性

    98℃

    3 min

    1

    变性

    98℃

    10 sec

    30-35

    退火

    60℃

    20 sec

    延伸

    72℃

    30 sec/kb

    终延伸

    72℃

    5 min

    1


    梯度温度退火程序(难扩增基因推荐程序): 
           

    步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性

    98℃

    3 min

    1

    变性

    98℃

    10 sec

    15,每个循环降低1℃

    梯度退火

    70-55℃

    20 sec

    延伸

    72℃

    30 sec/kb

    变性

    98℃

    10 sec

    20

    正常退火

    55℃

    20 sec

    延伸

    72℃

    30 sec/kb

    终延伸

    72℃

    5 min

    1

    【注】:1)预变性温度和时间:推荐温度:98℃,时间:3 min,高GC含量模板5-10 min。

         2)退火温度和时间:推荐温度:60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

          3)延伸温度和时间:推荐温度:72℃。时间:30 sec/kb,复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。

           4)扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20℃保存,防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端。

           5)不同扩增程序下的特点:                                                                                                                                  

    程序类型

    两步法

    三步法

    梯度退火

    速度

    最快

    中等

    特异性

    中等

    PCR产量

    中等

    最高

    中等

    检出率

    中等


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    货号

    规格

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