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Hieff NGS® 384 Dual Index Primer Kit for Illumina® ,Set 1(96 种)
产品货号:12613ES02
产品规格:96×2 T
产品价格:¥2753
类别:磁珠与模块

说明书下载

  • 产品信息


    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina® Set1

    12613ES02

    96×2 T

    2753.00

    Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina® Set2

    12614ES02

    96×2 T

    2753.00


    产品描述

    Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina®Illumina高通量测序平台文库构建专用试剂盒,共分为2个Set,每个Set包含二代测序建库中使用的PE adapter以及 8种i5 Index Primer12种i7 Index Primer 2个Set共提供16种i5 Index Primer24种i7 Index Primer,配合Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®Cat#12201)使用可构建多达384种不同组合的双端index标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。


    产品组分

    编号

    名称

    规格

    12613ES02

    PE Adapter

    2×336 μL

    i5 Index Primer 1-8

    60 μL each

    i7 Index Primer 1-12

    40 μL each

    12614ES02

    PE Adapter

    2×336 μL

    i5 Index Primer 9-16

    60 μL each

    i7 Index Primer 13-24

    40 μL each


    运输与保存方法

    冰袋运输。

    所有组分-20°C保存,有效期1年。


    注意事项

    1)本试剂盒中DNA Adapter的浓度为15 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。

    2)本试剂盒提供的PE Adapter为通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。

    3)本试剂盒每个Set包含8种i5 Index Primer12种i7 Index Primer,可以构建96种不同组合的双端Index标记文库,每个Set可构建192个DNA文库。2个Set共提供16种i5 Index Primer24种i7 Index Primer。您可以使用Cat#12613中的i5 Index Primer(或i7 Index Primer)与Cat#12614中的i7 Index Primer(或i5 Index Primer)组合用以构建多达384种不同组合的双端Index标记文库。

    4)切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4℃。

    5)使用Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina®试剂盒构建的DNA文库结构如下: 

      12613.jpg

    6)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    使用方法

    本试剂盒使用方法按照 Hieff NGS ® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina® 试剂盒操作说明进行。


    接头连接(
    Adapter
     Ligation):

    在末端修复产物两端连接特定的Illumina®接头,即Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®操作步骤3.2。

    1. 根据Input DNA量按照下表1选择合适的Adapter用量;

    1. 不同Input DNA推荐的Adapter使用浓度

    Input DNA

    Adapter : Input DNA摩尔比

    推荐Adapter(15 μM)使用量

    400 ng

    30:1

    3.5 μL

    300 ng

    40:1

    3.5 μL

    200 ng

    60:1

    3.5 μL

    100 ng

    100:1

    3.0 μL

    50 ng

    100:1

    1.5 μL


    【注】:
    Input DNA 摩尔数(pmol)≈Input DNA质量(ng)/[0.66×Input DNA平均长度(bp)]

    2. 将表2中的各种试剂解冻后颠倒混匀,置于冰上备用;

    3. 配制表2所示反应体系;

    2. Adapter Ligation反应体系

    名称

    体积(μL)

    dA-tailed DNA

    60

    Ligation Enhancer

    30*

    Quick T4 DNA Ligase

    5

    PE Adapter

    x**

    ddH2O

    5-x


    【注】:
    *Ligation Enhancer比较粘稠,请上下颠倒、振荡,充分混匀并瞬时后离心使用。

    **本公司接头浓度(Cat#12611;Cat#12612;Cat#12613;Cat#12614)与常规商业化试剂盒一致,皆为15 μmol/L。请根据注意事项三中的提示,计算接头用量。

    4. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液收集至管底

    5. 将PCR管置于PCR仪中,设置表3所示反应程序,进行接头连接反应:

    3. Adapter Ligation反应程序

    温度

    时间

    热盖

    Off

    20°C

    15 min

    4°C

    Hold


    【注】:
    Input DNA量较低,实验效果不理想时,可尝试将连接时间延长一倍。


    连接产物磁珠纯化(
    Post Ligation Clean Up)

    该步骤使用磁珠对连接产物进行纯化或分选。纯化可除去未连接的Adapter或Adapter Dimer等无效产物,分选可筛选特定长度DNA片段以符合测序需要,详细操作步骤参照Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®建库试剂盒说明书。


    文库扩增(
    Library
     Amplification

    该步骤将对纯化或长度分选后的接头连接产物进行PCR扩增富集,使用本试剂盒接头时,该步骤为必做步骤;

    1. 将表4中试剂解冻后颠倒混匀,置于冰上备用;

    2. 于无菌PCR管中配制表4所示反应体系

    4. PCR扩增反应体系

    名称

    体积(μL)

    2× Super Canace®ⅡHigh-Fidelity Mix

    25

    i5 Index Primer

    2.5

    i7 Index Primer

    2.5

    Adapter Ligated DNA

    20


    【注】:文库扩增引物来自
    Yeasen接头引物试剂盒(Cat#12611;Cat#12612;Cat#12613;Cat#12614)。

    3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液收集至管底

    4. 将PCR管置于PCR仪中,设置表5所示反应程序,进行PCR扩增

    5. PCR扩增反应程序

    温度

    时间

    循环数

    98°C

    1 min

    1

    98°C

    10 sec

    根据实验需要调整

    60°C

    30 sec

    72°C

    30 sec

    72°C

    5 min

    1

    4°C

    Hold

    -


    序列信息

    PE Adapter for Illumina:
    5´-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGT*C -3´
    5´-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T-3´

    i5 Index Primer for Illumina:

    5´-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5 Index]ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT -3´

    i7 Index Primer for Illumina:

    5´-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[i7 Index]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-3´

    [i5 Index]表示8 bp 的i5 Index序列,[i7 Index]表示8 bp 的i7 Index序列,各引物对应的Index名称、引物中包含的Index序列以及测序时对应的Index序列信息如下表所示:

    i5 Index Primers名称

    引物中Index序列

    测序对应Index序列

    i5 index Primer1

    CTCTCTAT

    CTCTCTAT

    i5 index Primer2

    TATCCTCT

    TATCCTCT

    i5 index Primer3

    GTAAGGAG

    GTAAGGAG

    i5 index Primer4

    ACTGCATA

    ACTGCATA

    i5 index Primer5

    AAGGAGTA

    AAGGAGTA

    i5 index Primer6

    CTAAGCCT

    CTAAGCCT

    i5 index Primer7

    CGTCTAAT

    CGTCTAAT

    i5 index Primer8

    TCTCTCCG

    TCTCTCCG

    i5 index Primer9

    TCGACTAG

    TCGACTAG

    i5 index Primer10

    TTCTAGCT

    TTCTAGCT

    i5 index Primer11

    CCTAGAGT

    CCTAGAGT

    i5 index Primer12

    GCGTAAGA

    GCGTAAGA

    i5 index Primer13

    CTATTAAG

    CTATTAAG

    i5 index Primer14

    AAGGCTAT

    AAGGCTAT

    i5 index Primer15

    GAGCCTTA

    GAGCCTTA

    i5 index Primer16

    TTATGCGA

    TTATGCGA


    i7 Index Primer名称  

    引物Index序列

    测序对应Index序列

    i7 index Primer1

    TCGCCTTA

    TAAGGCGA

    i7 index Primer2

    CTAGTACG

    CGTACTAG

    i7 index Primer3

    TTCTGCCT

    AGGCAGAA

    i7 index Primer4

    GCTCAGGA

    TCCTGAGC

    i7 index Primer5

    AGGAGTCC

    GGACTCCT

    i7 index Primer6

    CATGCCTA

    TAGGCATG

    i7 index Primer7

    GTAGAGAG

    CTCTCTAC

    i7 index Primer8

    CAGCCTCG

    CGAGGCTG

    i7 index Primer9

    TGCCTCTT

    AAGAGGCA

    i7 index Primer10

    TCCTCTAC

    GTAGAGGA

    i7 index Primer11

    TCATGAGC

    GCTCATGA

    i7 index Primer12

    CCTGAGAT

    ATCTCAGG

    i7 index Primer13

    TAGCGAGT

    ACTCGCTA

    i7 index Primer14

    GTAGCTCC

    GGAGCTAC

    i7 index Primer15

    TACTACGC

    GCGTAGTA

    i7 index Primer16

    AGGCTCCG

    CGGAGCCT

    i7 index Primer17

    GCAGCGTA

    TACGCTGC

    i7 index Primer18

    CTGCGCAT

    ATGCGCAG

    i7 index Primer19

    GAGCGCTA

    TAGCGCTC

    i7 index Primer20

    CGCTCAGT

    ACTGAGCG

    i7 index Primer21

    GTCTTAGG

    CCTAAGAC

    i7 index Primer22

    ACTGATCG

    CGATCAGT

    i7 index Primer23

    TAGCTGCA

    TGCAGCTA

    i7 index Primer24

    GACGTCGA

    TCGACGTC

    Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina® Set1(Cat#12613)引物组合方案

    i7 Idx

    i5 Idx

    P701

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    Hieff NGS® 384 Dual Index Primer Kit for Illumina® Set2(Cat#12614)引物组合方案

    i7 Idx

    i5 Idx

    P713

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    Hieff NGS®   384 Dual Index Primer Kit for Illumina® ,Set 1(96 种)

    96×2 T

    2753

    12614ES02

    Hieff NGS®  384 Dual Index Primer Kit for Illumina® ,Set 2(96 种)

    96×2 T

    2753

    完整接头

    12615ES04/16

    Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 1

    12×4/

    12×16 T

    1256/4526

    12616ES04/16

    Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 2

    12×4/

    12×16 T

    1256/4536

    12617ES04/16

    Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 3

    12×4/

    12×16 T

    1256/4536

    12618ES04/16

    Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 4

    12×4/

    12×16 T

    1256/4536

    Tn5接头

    12610ES96

    Hieff NGS® Tagment Index Kit for Illumina®(96 Index)

    96 T

    1365

     

    HB190103