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Hieff NGS®  96 Single Index Primer Kit for Illumina® , Set 1(48种)
产品货号:12611ES02
产品规格:48×2 T
产品价格:¥1493
类别:磁珠与模块

说明书下载

  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff NGS®  96 Single Index Primer Kit for Illumina® , Set 1(48种)

    12611ES02

    48×2 T

    1493.00

    Hieff NGS®  96 Single Index Primer Kit for Illumina® , Set 2(48种)

    12612ES02

    48×2 T

    1493.00


    产品描述


    Hieff NGS®  96 Single Index Primer Kit for Illumina® , Set 1(48种)
    Illumina高通量测序平台文库构建专用试剂盒,共分为2个Set,每个Set包含48种Index Primer。本试剂盒提供了二代测序建库中使用的adapter和单端96种Index Primer,适用于Illumina®高通量测序平台多样品DNA文库构建。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。


    产品组分

    编号

    名称

    规格

    12611ES02

    PE Adapter

    336 μL

    Universal Primer

    240 μL

    Index Primer 1-48

    5 μL each

    12612ES02

    PE Adapter

    336 μL

    Universal Primer

    240 μL

    Index Primer 49-96

    5 μL each


    运输与保存方法

    冰袋运输。

    所有组分-20°C保存,有效期1年。


    注意事项

    1. 本试剂盒中DNA Adapter的浓度为15 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。

    2. 本试剂盒提供的DNA Adapter为通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。

    3. 本试剂盒每个Set包含48种Index Primer,每种Index Primer可以构建2个DNA文库,每个Set可以构建96个DNA文库。

    4. 切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4℃。

    5. 使用Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina®试剂盒构建的DNA文库结构如下:

      12611.jpg

    6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

     

    使用方法

    本试剂盒使用方法按照 Hieff NGS ® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina® 试剂盒操作说明进行。


    接头连接(
    Adapter
     Ligation):

    在末端修复产物两端连接特定的Illumina®接头,即Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®操作步骤3.2。

    1. 根据Input DNA量按照下表1选择合适的Adapter用量;

    1. 不同Input DNA推荐的Adapter使用浓度

    Input DNA

    Adapter : Input DNA摩尔比

    推荐Adapter(15 μM)使用量

    400 ng

    30:1

    3.5 μL

    300 ng

    40:1

    3.5 μL

    200 ng

    60:1

    3.5 μL

    100 ng

    100:1

    3.0 μL

    50 ng

    100:1

    1.5 μL


    【注】:
    Input
     DNA 摩尔数(pmol)≈Input DNA质量(ng)/[0.66×Input DNA平均长度(bp)]

    2. 将表2中的各种试剂解冻后颠倒混匀,置于冰上备用;

    3. 配制表2所示反应体系;

    2. Adapter Ligation反应体系

    名称

    体积(μL)

    dA-tailed DNA

    60

    Ligation Enhancer

    30*

    Quick T4 DNA Ligase

    5

    PE Adapter

    x**

    ddH2O

    5-x


    【注】:
    *Ligation Enhancer比较粘稠,请上下颠倒、振荡,充分混匀并瞬时后离心使用。

    **本公司接头浓度Cat#12611;Cat#12612;Cat#12613;Cat#12614)与常规商业化试剂盒一致,皆15 μmol/L。请根据注意事项三中的提示,计算接头用量

    4. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液收集至管底

    5. 将PCR管置于PCR仪中,设置表3所示反应程序,进行接头连接反应

    3. Adapter Ligation反应程序

    温度

    时间

    热盖

    Off

    20°C

    15 min

    4°C

    Hold


    【注】:
    Input DNA量较低,实验效果不理想时,可尝试将连接时间延长一倍。


    连接产物磁珠纯化(
    Post Ligation Clean Up)

    该步骤使用磁珠对连接产物进行纯化或分选。纯化可除去未连接的Adapter或Adapter Dimer等无效产物,分选可筛选特定长度DNA片段以符合测序需要,详细操作步骤参照Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®建库试剂盒说明书。


    文库扩增(
    Library
     Amplification

    该步骤将对纯化或长度分选后的接头连接产物进行PCR扩增富集,使用本试剂盒接头时,该步骤为必做步骤;

    1. 将表4中试剂解冻后颠倒混匀,置于冰上备用

    2. 于无菌PCR管中配制表4所示反应体系

    4. PCR扩增反应体系

    名称

    体积(μL)

    2× Super Canace®High-Fidelity Mix

    25

    Universal Primer

    2.5

    Index Primer

    2.5

    Adapter Ligated DNA

    20


    【注】:
    文库扩增引物来自Yeasen接头引物试剂盒(Cat#12611;Cat#12612;Cat#12613;Cat#12614)。

    3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液收集至管底

    4. 将PCR管置于PCR仪中,设置表5所示反应程序,进行PCR扩增

    5. PCR扩增反应程序

    温度

    时间

    循环数

    98°C

    1 min

    1

    98°C

    10 sec

    根据实验需要调整

    60°C

    30 sec

    72°C

    30 sec

    72°C

    5 min

    1

    4°C

    Hold

    -

    序列信息

    PE Adapter for Illumina:

    5´-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTC -3´
    5´-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3´

    Universal Primer for Illumina:
    5´-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT -3´

    Index Primer for Illumina:

    5´-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATXXXXXXXXGTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-3´

    xxxxxxxx表示8 bp 的Index序列,各引物对应的Index名称、引物中包含的Index序列以及测序时对应的Index序列信息如下表所示:

     

    Index Primer名称

    引物中Index序列

    测序对应Index序列

    Index Primer名称

    引物中Index序列

    测序对应Index序列

    Index Primer 1

    ATCACGTT

    AACGTGAT

    Index Primer 25

    TGCGATCT

    AGATCGCA

    Index Primer 2

    CGATGTTT

    AAACATCG

    Index Primer 26

    TTCCTGCT

    AGCAGGAA

    Index Primer 3

    TTAGGCAT

    ATGCCTAA

    Index Primer 27

    TAGTGACT

    AGTCACTA

    Index Primer 4

    TGACCACT

    AGTGGTCA

    Index Primer 28

    TACAGGAT

    ATCCTGTA

    Index Primer 5

    ACAGTGGT

    ACCACTGT

    Index Primer 29

    TCCTCAAT

    ATTGAGGA

    Index Primer 6

    GCCAATGT

    ACATTGGC

    Index Primer 30

    TGTGGTTG

    CAACCACA

    Index Primer 7

    CAGATCTG

    CAGATCTG

    Index Primer 31

    TACTAGTC

    GACTAGTA

    Index Primer 8

    ACTTGATG

    CATCAAGT

    Index Primer 32

    TTCCATTG

    CAATGGAA

    Index Primer 9

    GATCAGCG

    CGCTGATC

    Index Primer 33

    TCGAAGTG

    CACTTCGA

    Index Primer 10

    TAGCTTGT

    ACAAGCTA

    Index Primer 34

    TAACGCTG

    CAGCGTTA

    Index Primer 11

    GGCTACAG

    CTGTAGCC

    Index Primer 35

    TTGGTATG

    CATACCAA

    Index Primer 12

    CTTGTACT

    AGTACAAG

    Index Primer 36

    TGAACTGG

    CCAGTTCA

    Index Primer 13

    TGGTTGTT

    AACAACCA

    Index Primer 37

    TACTTCGG

    CCGAAGTA

    Index Primer 14

    TCTCGGTT

    AACCGAGA

    Index Primer 38

    TCTCACGG

    CCGTGAGA


     

    Index Primer名称

    引物中

    Index序列

    测序对应Index序列

    Index Primer名称

    引物中Index序列

    测序对应Index序列

    Index Primer 15

    TAAGCGTT

    AACGCTTA

    Index Primer 39

    TCAGGAGG

    CCTCCTGA

    Index Primer 16

    TCCGTCTT

    AAGACGGA

    Index Primer 40

    TAAGTTCG

    CGAACTTA

    Index Primer 17

    TGTACCTT

    AAGGTACA

    Index Primer 41

    TCCAGTCG

    CGACTGGA

    Index Primer 18

    TTCTGTGT

    ACACAGAA

    Index Primer 42

    TGTATGCG

    CGCATACA

    Index Primer 19

    TCTGCTGT

    ACAGCAGA

    Index Primer 43

    TCATTGAG

    CTCAATGA

    Index Primer 20

    TTGGAGGT

    ACCTCCAA

    Index Primer 44

    TGGCTCAG

    CTGAGCCA

    Index Primer 21

    TCGAGCGT

    ACGCTCGA

    Index Primer 45

    TATGCCAG

    CTGGCATA

    Index Primer 22

    TGATACGT

    ACGTATCA

    Index Primer 46

    TCAGATTC

    GAATCTGA

    Index Primer 23

    TGCATAGT

    ACTATGCA

    Index Primer 47

    TAGTCTTG

    CAAGACTA

    Index Primer 24

    TTGACTCT

    AGAGTCAA

    Index Primer 48

    TTCAGCTC

    GAGCTGAA

     

    Index Primer名称

    引物中

    Index序列

    测序对应Index序列

    Index Primer名称

    引物中Index序列

    测序对应Index序列

    Index Primer 49

    TGTCTATC

    GATAGACA

    Index Primer 73

    GCAACATT

    AATGTTGC

    Index Primer 50

    TATGTGGC

    GCCACATA

    Index Primer 74

    GGTCGTGT

    ACACGACC

    Index Primer 51

    TTACTCGC

    GCGAGTAA

    Index Primer 75

    GAATCTGT

    ACAGATTC

    Index Primer 52

    TCGTTAGC

    GCTAACGA

    Index Primer 76

    GTACATCT

    AGATGTAC

    Index Primer 53

    TACCGAGC

    GCTCGGTA

    Index Primer 77

    GAGGTGCT

    AGCACCTC

    Index Primer 54

    TGTTCTCC

    GGAGAACA

    Index Primer 78

    GCATGGCT

    AGCCATGC

    Index Primer 55

    TTCGCACC

    GGTGCGAA

    Index Primer 79

    GTTAGCCT

    AGGCTAAC

    Index Primer 56

    TTGCGTAC

    GTACGCAA

    Index Primer 80

    GTCGCTAT

    ATAGCGAC

    Index Primer 57

    TCTACGAC

    GTCGTAGA

    Index Primer 81

    GGAATGAT

    ATCATTCC

    Index Primer 58

    TGACAGAC

    GTCTGTCA

    Index Primer 82

    GAGCCAAT

    ATTGGCTC

    Index Primer 59

    TAGAACAC

    GTGTTCTA

    Index Primer 83

    GCTCCTTG

    CAAGGAGC

    Index Primer 60

    TCATCCTA

    TAGGATGA

    Index Primer 84

    GTAAGGTG

    CACCTTAC

    Index Primer 61

    TGCTGATA

    TATCAGCA

    Index Primer 85

    GAGGATGG

    CCATCCTC

    Index Primer 62

    TAGACGGA

    TCCGTCTA

    Index Primer 86

    GTTGTCGG

    CCGACAAC

    Index Primer 63

    TGTGAAGA

    TCTTCACA

    Index Primer 87

    GGATTAGG

    CCTAATCC

    Index Primer 64

    TCTCTTCA

    TGAAGAGA

    Index Primer 88

    GATAGAGG

    CCTCTATC

    Index Primer 65

    TTGTTCCA

    TGGAACAA

    Index Primer 89

    GTGTGTCG

    CGACACAC

    Index Primer 66

    TGAAGCCA

    TGGCTTCA

    Index Primer 90

    GCAATCCG

    CGGATTGC

    Index Primer 67

    TACCACCA

    TGGTGGTA

    Index Primer 91

    GACCTTAG

    CTAAGGTC

    Index Primer 68

    TGCGTGAA

    TTCACGCA

    Index Primer 92

    GCCTGTTC

    GAACAGGC

    Index Primer 69

    GGTGAGTT

    AACTCACC

    Index Primer 93

    GCACTGTC

    GACAGTGC

    Index Primer 70

    GATCTCTT

    AAGAGATC

    Index Primer 94

    GCTAACTC

    GAGTTAGC

    Index Primer 71

    GTGTCCTT

    AAGGACAC

    Index Primer 95

    GATTCATC

    GATGAATC

    Index Primer 72

    GACGGATT

    AATCCGTC

    Index Primer 96

    GTCTTGGC

    GCCAAGAC

      

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    12611ES02

    Hieff NGS®  96 Single Index Primer Kit for Illumina® , Set 1(48种)

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    1493

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    96×2 T

    2753

    12614ES02

    Hieff NGS®  384 Dual Index Primer Kit for Illumina® ,Set 2(96 种)

    96×2 T

    2753

    完整接头

    12615ES04/16

    Hieff  NGS® Complete Adapter Kit for Illumina, Set 1

    12×4/

    12×16 T

    1256/4526

    12616ES04/16

    Hieff  NGS® Complete Adapter Kit for Illumina, Set 2 

    12×4/

    12×16 T

    1256/4536

    12617ES04/16

    Hieff  NGS® Complete Adapter Kit for Illumina, Set 3

    12×4/

    12×16 T

    1256/4536

    12618ES04/16

    Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 4

    12×4/

    12×16 T

    1256/4536

    Tn5接头

    12610ES96

    Hieff NGS® Tagment Index Kit for Illumina®(96 Index)

    96 T

    1365

     

     

    HB190103