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Hieff NGS® Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module 快速末端修复/A尾添加模块
产品货号:12608ES24
产品规格:24 T
产品价格:¥2066
类别:模块

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff NGS® Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module

    快速末端修复/A尾添加模块

    12608ES24

    24 T

    2066.00

    12608ES96

    96 T

    6166.00


    产品
    描述

    Hieff NGS® Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module是针对Illumina®高通量测序平台文库构建而专业设计的DNA末端修复/A尾添加模块,具有高效、快速、易实现自动化的优势。本产品兼1 ng-1 μg片段化Input DNA,可在单管内实现片段化DNA的末端补平、5'端磷酸化和3'端加A尾反应,得到5'末端含磷酸基团3'末端带有dA突出的DNA产物。该产物无需纯化,即可使用Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation ModuleCat#12607)进行文库构建接头连接反应。

    本产品已Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation ModuleCat#12607),2×Hieff Canace® High-Fidelity Mix for Library AmplificationCat#12620)共同用于DNA文库构建,通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。产品中提供的所有试剂组分均经过严格质检,最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。


    产品组分

    组分编号

    组分名称

    24 T

    96 T

    12608-A

    End Repair/dA-Tailing Buffer

    144 μL

    576 μL

    12608-B

    End Repair/dA-Tailing Enzyme

    96 μL

    384 μL


    质量
    控制

    Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Enzyme 

    1. SDS-PAGE纯度:>95%。

    2. 核酸内切酶活性50 μL反应体系中加入10 μL本酶和1 μg φX174 RF I DNA,37°C孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,RF II转化比率<10%。

    3. 磷酸酶活性:在磷酸酶活性检测缓冲液中加入10 μL本酶和2.5 mM对硝基苯磷酸,37°C孵育4小时。经光谱测定法检测,405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。

    4. 功能活性:在1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Enzyme中加入1 μL本酶和0.5 μg包含5'3'突出末端的片段化DNA,25°C孵育20分钟。经毛细管电泳检测,末端修复、加dA尾并磷酸化的DNA比率>95%。

    Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer

    1. 16小时孵育检测:50 μL反应体系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和1 μg HindIII-λDNA,37°C孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解;50 μL反应体系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和1 μg T3 DNA,37°C孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解。

    2. 核酸内切酶活性50 μL反应体系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和1 μg φX174 RF I DNA,37°C孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,RF II转化比<10%。

    3. RNase活性:在1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer中加入40 ng FAM-RNA,37°C孵育16小时。经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,条带无降解。

    4. 磷酸酶活性:在磷酸酶活性检测缓冲液中加入1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和2.5 mM对硝基苯磷酸,37°C下孵育4小时。经光谱测定法检测,405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。


    测序
    验证

    本品Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation ModuleCat#12607),2×Hieff Canace® High-Fidelity Mix for Library AmplificationCat#12620)共同用于DNA文库构建,已通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。


    运输与保存方法

    冰袋运输。

    -20℃保存,有效期1


    注意事项

    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


    使用方法

    1. 将表1中各试剂解冻后,颠倒混匀,置于冰上备用。

    2. 于无菌PCR管中配制表1所示反应体系。

    1 末端修复/dA尾添加PCR反应体系

    名称

    体积(μL)

    Fragmented DNA

    x

    End Repair/dA-Tailing Buffer

    6

    End Repair/dA-Tailing Enzyme

    4

    ddH2O

    Up to 60 μL

    3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液离心至管底。

    4. 将上述PCR管置于PCR仪,设置表2所示反应程序,进行末端修复/dA尾添加反应。

    2 末端修复/dA尾添加PCR反应程序

    温度

    时间

    热盖105°C

    On

    20°C

    30 min

    65°C

    30 min

    4°C

    Hold

    5. 产物如需纯化,可使用Hieff NGS® DNA Selection BeadsCat#12601AMPure XP BeadsCat#A63880或其他等效产品


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    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module

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