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Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit mRNA纯化试剂盒
产品货号:12603ES24
产品规格:24 T
产品价格:¥616
类别:磁珠与模块

说明书下载

  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit

    mRNA纯化试剂盒

    12603ES24

    24 T

    616.00

    12603ES96

    96 T

    2266.00


    产品描述

    Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit是翊圣生物自主研发的专门用于纯化mRNA的磁珠试剂盒。其中的mRNA Capture beads为偶联了Oligo(dT)的微米级顺磁性微球,通过与带有poly(A)尾巴的mRNA相结合,将mRNA从0.1-4 μg完整度良好的总RNA进行分离纯化。


    产品组分

    组分名称

    12603ES24

    12603ES96

    mRNA Capture Beads

    1.2 mL

    4.8 mL

    Beads Binding Buffer

    1.2 mL

    4.8 mL

    Beads Wash Buffer

    15 mL

    60 mL

    Tris Buffer

    1.2 mL

    4.8 mL

    Nuclease-free water

    1 mL

    4 mL


    运输与保存方法

    冰袋运输。

    2-8℃保存,效期一年。避免冷冻!


    使用方法

    一、 自备材料

    磁力架,Nuclease-free离心管。

     

    二、操作流程

    image.png 

    1 mRNA纯化试剂盒操作流程

    二、 操作步骤

    3.1 实验前准备

    mRNA Capture Beads4℃取出,静置使其温度平衡至室温(约30 min)。

    3.2 样本准备

    在一个Nuclease-free PCR管中,用Nuclease-free water0.1-4 μgRNA稀释至50 μL

    将稀释的RNA置于PCR仪中,65℃,5 min4℃hold,使RNA变性冰上放置备用 

    3.3 mRNA与磁珠的结合

           ① 颠倒或涡旋振荡混匀磁珠,吸取50 μL磁珠悬液加入50 μL 的变性RNA样品中,用移液器反复吹打6次,使其充分混匀。

    室温孵育5 min,使mRNA与磁珠完全结合。

    将样品置于磁力架中,室温静置5 min,使mRNA与总RNA分离,吸除全部上清。

    3.4 样本的洗涤

    将样品从磁力架上取出,加入200 μL Beads Wash Buffer用移液器反复吹打6次以彻底混匀

    ② 将样品置于磁力架中,室温静置5 min,吸除全部上清。

    重复上一步骤,共洗涤两次。

    3.5 mRNA样本第一轮洗脱

    将样品从磁力架上取出,加入50 μL Tris Buffer重悬磁珠,用移液器反复吹打6次以彻底混匀。

    将样品放置于PCR仪中,80℃2 min25℃holdmRNA洗脱下来。

    3.6 mRNA与磁珠的再次结合

    加入50 μL Beads Binding Buffer,用移液器反复吹打6次以彻底混匀。

    室温孵育5 min,使mRNA结合到磁珠上。

    将样品置于磁力架中,室温静置5 min,小心移除上清。

    3.7 样本的洗涤

    将样品从磁力架上取出,加入200 μL Beads Wash Buffer用移液器反复吹打6次彻底混匀,将样品重新放回至磁力架中室温静置5 min,然后吸除全部上清。

    【注】最后需要用10 μL移液器吸干净残留液体。

    3.8 mRNA样本终洗脱

    方案一:用于逆转录反应。

    将样品从磁力架上取出,加入12 μL Nuclease-free water重悬磁珠,用移液器吹打6次以彻底混匀将样品置于PCR仪中80℃,2 min后,立即置于磁力架上室温静置5 min待溶液澄清后,小心吸取10 μL上清至另一新的Nuclease-free PCR管中。

    方案二:用于RNA文库的构建。

    可根据相关试剂盒说明书加入相应体积的Frag/Primer Buffer,进行文库构建。

    【注】:样品可置于冰上继续进行NGS文库构建或其他分析应用(建议立即进行后续反应),也可以置于-80℃保存。


    注意事项

    1)磁珠使用前务必要回温至室温,并充分混匀,否则可能影响样品的回收效率。

    2)操作过程要严格保证无RNase和核酸污染。

    3)本产品和其他试剂配套使用时,请按照具体实验说明来进行操作。

    4)想要获得好的纯化效果,需要有完整度良好的总RNA,确保RIN值在7.0及以上。

    5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作


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    HB190103