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Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA polymerase
产品货号:10144ES60
产品规格:100 U
产品价格:¥393
类别:高保真PCR

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA polymerase

    10144ES60

    100 U

    393.00

    10144ES76

    500 U

    1993.00


    产品描述

    Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA polymerase是一种基于Pfu DNA Polymerase改造而成的新一代高保真DNA聚合酶,和Pfu DNA Polymerase相比,Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA polymerase的性能得到大幅度提升,针对复杂的模板也能快速准确的完成PCR反应。其保真性是Taq DNA Polymerase的52倍,是Pfu DNA Polymerase6倍,且完全克服了常规高保真酶无法以dUTP为原料进行聚合反应、无法使用含有dUTP的扩增引物以及无法使用含有dUTP的DNA作为扩增模板等诸多弊病。本产品配备了优化后的酶缓冲液,添加了PCR增强组分,使得该酶具有极强的扩增效率和广泛的模板适应性,非常适合复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。


    产品组分

    编号

    组分

    规格

    10144ES60100 U

    10144ES76500 U

    10144-A

    Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA Polymerase(1 U/μL)

    100 μL

    500 μL

    10144-B

    2×Canace® II Uracil PCR buffer (含Mg2+,dNTPs)

    1 mL×3

    1 mL×15


    运输和保存方法

    冰袋运输。

    -20℃保存。有效期一年。

    产品应用

    使用含dUTP的引物进行高保真文库扩增

    使用含dUTP的模板进行高保真文库扩增

    使用含dUTP的dNTP进行高保真文库扩增

    质量控制

    Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA polymerase(1 U/µL)

    SDS-PAGE纯度:纯度>95%;

    核酸内切酶残留:50 µL反应中加入10 µL酶和1 µg φX174 RF I DNA,37°C孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测RF II转化比率<10%;

    磷酸酶活性检测:在磷酸酶活性检测缓冲液中加入10 µL酶和2.5 mM对硝基苯磷酸,37℃下孵育4小时。经光谱测定法检测,405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰;

    扩增性能检测:50 µL反应体系中加入1 µL本品,10 ng人基因组DNA以及0.5μM扩增引物扩增1 kb片段。30个循环后经琼脂糖凝胶电泳检测,有特异性1 kb扩增产物可见;

    2×Canace® II Uracil PCR buffer 

    16小时孵育检测:50 µL反应体系中包含25 µL本品和1 µg HindIII-λDNA,37℃下孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解;50 µL反应体系中包含25 µL本品和1 µL T3 DNA,37℃下孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解;

    磷酸酶活性检测:在磷酸酶活性检测缓冲液中加入2×Canace® II Uracil PCR buffer2.5 mM对硝基苯磷酸,37℃下孵育4小时。经光谱测定法检测,405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。


    注意事项

    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    使用方法

    Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA polymerase与常规高保真酶的使用方法略有不同。在使用前,请务必仔细阅读使用说明。

    1. 推荐反应体系

    所有操作应于冰上进行,2×Canace® II Uracil PCR buffer解冻后请充分混匀。体系配置之前请预热PCR仪,各组分添加完成之后用移液器吸打充分混匀并短暂离心至管底,然后置于预热的PCR仪中进行反应。所有组份使用完毕之后及时放回-20℃保存。

    1 PCR扩增反应体系

    组分

    体积

    模板或接头连接产物

    X µL

    2×Canace® II Uracil PCR buffer

    25 µL

    正向引物 (10-25 μM

    1-2.5 µL

    反向引物 (10-25 μM

    1-2.5 µL

    Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA polymerase(1 U/µL

    1 µL

    ddH2O

    Total to 50 µL

    【注】:

    1)试剂使用:使用前要充分解冻混匀。

    2)模板:使用纯化后的高质量DNA模板可以显著提高扩增效率和成功率;
    3)dNTP:推荐dNTP使用终浓度为200 μM。试剂盒中提供的dNTP中不含dUTP,如特殊情况下需要制备含dUTP的模板,可自行额外添加dUTP至终浓度为400 μM
    4)聚合酶浓度:推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化,请勿超过2 U/50 μL。为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物,建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。

    5)Mg2+终浓度:体系终浓度为2 mM。如有特殊需要,可向我公司咨询,要求提供低Mg2+浓度或不含Mg2+buffer。

    2.推荐反应程序

    2 PCR扩增反应程序

    步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性

    98°C

    1 min

    1

    变性

    98°C

    10 sec

    1~15(根据实验要求)

    退火

    60°C

    30 sec

    延伸

    72°C

    30 sec

    终延伸

    72°C

    5 min

    1

    Hold

    4°C

    -

    -

    【注】:

    1)预变性温度和时间:推荐使用98℃。预变性推荐时间:质粒DNA等简单模板为30 sec;文库为1 min;cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min;高GC含量模板为5-10 min;

    2)退火温度和时间:推荐使用60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状;

    3)延伸温度和时间:推荐使用72℃。延伸时间根据实际需要进行调整;

     

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    价格(元)

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    653/2453

     

    HB181206