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Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 动物组织直接PCR试剂盒
产品货号:10184ES50
产品规格:50 T
产品价格:¥433.00
类别:直扩PCR

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 动物组织直接PCR试剂盒

    10184ES50

    50 T

    433.00

    Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 动物组织直接PCR试剂盒

    10184ES70

    200 T

    1453.00


    产品描述

    动物组织直接PCR试剂盒是一款可直接对不同动物组织进行PCR扩增的试剂盒,适应性广、稳定性强、操作简易。

    本试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系,可以快速的裂解多种动物组织样品并释放出基因组DNA,如昆虫足翅、鼠尾、鼠趾、动物皮肤和内脏等。裂解产物可以用于DNA提取纯化、也可以直接用于PCR反应、也可以在-20℃或以下温度条件下长期保存备用。

    本试剂盒中提供的2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)具有很强的扩增兼容性,不需要额外采用纯化提取试剂去除裂解产物中的各种残骸杂质,能直接以待测样品裂解液为模板,进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液,包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分,大大简化扩增步骤的操作过程,降低污染几率。

    该试剂盒可用于动物基因扩增检测、转基因动物基因型鉴定等。


    产品组分

    类别

    编号

    组分

    产品编号/规格

    储存

    10184ES50(50 T)

    10184ES70(200 T)

    Part I

    10184-A

    Lysis Buffer

    10 mL

    20 mL × 2

    室温或4℃

    10184-B

    Proteases

    100 μL

    400 μL

    -20℃

    Part II

    10184-C

    2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)

    500 μL

    1 mL×2

    -20℃

    a)Lysis Buffer 和Proteases两种组分配合使用于动物组织裂解;

    b)2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye) 包含PCR扩增所需要的热启动Taq DNA聚合酶、dNTP和Mg2+等;已混有溴酚蓝染料作为电泳指示剂, PCR产物可以直接进行电泳。


    运输方法


    冰袋运输。


    保存方法

    1. 试剂10184-A【Lysis Buffer】为动物组织裂解缓冲液,在常温下,可保存12个月。

    2. 试剂10184-B【Proteases】为动物组织裂解剂,使用时请勿长久开盖,建议保存于-20℃,避免反复冻融。

    3. 试剂10184-C【2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)】,建议保存于-20℃,避免反复冻融。


    操作方法


    样品基因组
    DNA释放

    1. 在离心管中加入200 μL Lysis Buffer2 μL Proteases,轻轻涡旋混匀;

    2. 取约10 mg动物组织,置于上述离心管中,轻轻涡旋混匀。

    3. 55℃孵育5-30 min,然后95℃处理10 min。

    4. 12000 rpm离心5 min。

    5. 将上清转移至新的离心管,4℃或-20℃保存或直接用于PCR扩增。

    】:a)Lysis BufferProteases混合后尽快使用,不宜长期保存;大量样本操作时,可以将Lysis BufferProteases按100 μL:1 μL的比例混匀备用。

                   b)组织应取少量并尽量剪碎,以便裂解反应更顺利进行;鼠尾组织可以取1-5 mm;皮肤内脏等可以取约一粒米大小碎块。

                   c)55℃孵育,一般5 min即可满足多数PCR需求,如鼠尾、鼠耳等组织;若需要的DNA量较大或样品较难裂解,可将时间延长至30 min或更久;组织块不需完全裂解,残余的部分在后续离心步骤中可被除去。

    PCR反应鉴定——PCR反应体系

    组分

    体积(μL)

    终浓度

    2× Tissue Direct PCR Mix(With Dye)

    10

    Forward Primer (10 μM)

    0.5

    0.25 μM

    Reverse Primer (10 μM)

    0.5

    0.25 μM

    裂解产物(DNA模板) 

    1

    -

    ddH2O

    To 20

    -

    】:各组分使用前应充分混匀。

    a)模板使用量:建议1-10%总体系。避免超过总体系的20%。

    b)引物终浓度:推荐使用0.2-0.25 μM。反应性能较差时,可在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度。

    c反应体系:推荐使用20 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

    d体系配制:配制好PCR反应体系,置于涡旋仪上涡旋混匀,瞬时离心将反应液集于管底。

    e对照反应:建议进行PCR时,设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

    PCR反应鉴定——PCR反应条件

    循环步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性

    94℃

    5 min

    1

    变性

    94℃

    5 sec

    35(推荐25-40 )

    退火

    50-65℃

    5 sec

    延伸

    72℃

    5 sec

    终延伸

    72℃

    5 min

    1

    【注】:a)退火温度:请参考引物的理论Tm 值,退火温度可设置低于引物理论值5℃,或通过梯度PCR确定最佳温度;
                        b)延伸时间:需要根据片段的长度来确定,对于1 kb以内的DNA片段,建议延长时间为5 sec;对于1 kb及以上

    的片段可以按15 sec/kb设置延伸时间。

    注意事项


    1. 建议使用新鲜采取的动物组织,若为长期冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响PCR效率;

    2. 建议扩增片段长度1 kb以内,以便扩增效率最佳;

    3. 本试剂盒仅供经过科研训练的实验人员使用,非实验人员或未经相应培训的人员请在监管下使用,勿独自使用;

    4. 为了您的安全和健康,请穿实验服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防护性措施进行实验操作。


    常见问题与解决方法

    常见问题

    可能原因

    解决方法

    阳性对照、待测样本均无条带。

    PCR反应体系或反应条件不合适。

    使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。

    PCR试剂保存不当失去活性。

    2× PCR Mix应保存于-20℃,使用时避免反复冻融。若使用频繁,可在4℃短时间存放。

    引物设计问题。

    尝试重新设计引物进行检查。

    阳性对照有目的条带,待测样本无条带或条带弱。

    不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。

    使用新鲜的试剂。

    加入组织裂解液过量。

    增大反应体系,或减少裂解液的用量。

    样本裂解混合液保存不当或保存时间过久,DNA基因组已经降解。

    裂解混合液液可在4℃保存2-3天,尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。

    模板加入量不适合。

    在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时,可以降模板浓度调节到低于10%的范围。

    PCR循环数不足。

    适当增加PCR的循环数,推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂,一般PCR反应要比用纯化的 DNA模板多5-10个循环为佳。

    非特异性扩增

    PCR退火温度太低,循环数、引物浓度或模板浓度太高。

    增加PCR退火温度,降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。

    PCR引物错配。

    重新设计PCR引物。

    配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。

    PCR反应体系的配制在低温下进行,配制完成后尽快进行PCR扩增反应。

    阴性对照出现目的条带

    操作工具或试剂污染。

    实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

    样本间交叉污染。

    每个取样器只对一个样本使用;或取完一个样本后,将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中,反复涮洗,然后用干净的纸巾擦干残液。


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