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Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)
产品货号:11123ES10
产品规格:10 T
产品价格:¥236.00
类别:逆转录酶

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

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    价格(元)

    Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)

    11123ES10

    10 T

    -20

    236.00

    Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)

    11123ES60

    100 T

    -20

    955.00


    产品描述

    Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)基于Hifair®  Reverse Transcriptase而开发的即用型预混液。该酶的热稳定性大幅度提高,可耐受高达50的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。

    该预混液包含gDNA digester和2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus。gDNA digester可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染,保证后续结果更加可靠。2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有逆转录反应所需的所有组分(Buffer,dNTP,Hifair® Ⅱ Reverse TranscriptaseRNase inhibitor,Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix),只需加入RNA模板和 RNase-free ddH2O即可进行逆转录反应,并同时终止gDNA digester的作用,保证cDNA的完整性。

    该产品适用于两步法RT-qPCR检测,针对qPCR进行Random primers/ Oligo (dT)18 primer的比例优化,使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始,并具有相同的逆转录效率,最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。逆转录产物兼容SYBR® Green和探针法qPCR,可以根据实验目的,选择UNICON® qPCR SYBR® Green Master Mix,Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix或Hieff® qPCR TaqMan Probe Master Mix等试剂配合使用,进行高性能的基因表达分析。


    产品组分

    编号

    组分

    产品编号/规格

    11123ES10 (10 T)

    11123ES60 (100 T)

    11123-A

    RNase-free ddH2O

    1 mL

    1 mL

    11123-B

    5×gDNA digester Buffer

    20 μL

    200 μL

    11123-C

    gDNA digester

    10 μL

    100 μL

    11123-D

    2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus

    100 μL

    1 mL

    】:2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有gDNA digester抑制剂。


    运输与保存方法

    干冰运输。-20保存。


    注意事项

    1)gDNA digester和2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有高浓度的甘油,使用前请短暂离心,吹打混匀。

    2)建议RNA是溶于水而不是TE Buffer因为TE Buffe会干扰gDNA去除以及逆转录反应

    3)可以不经过基因组去除步骤,直接进行逆转录,这样所得到的结果与使用Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix  (Cat No. 11120ES) 效果一致。但是请勿将gDNA digester与11120ES中的2×Hifair® Ⅱ SuperMix配套使用,因不含终止gDNA digester反应的成分,会影响反转录和后续的qPCR实验

    4)反应液的配制应在冰上操作完成,操作过程应避免RNase污染;

    5) 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

    第一链cDNA合成操作步骤

    1. 残留基因组DNA去除

    RNase free离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。42孵育2 min。

    组分

    使用量

    RNase free ddH2O

    To 10 μL

    5×gDNA digester Buffer

    2 μL

    gDNA digester

    1 μL

    模板RNA

    Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA: 1 ng-500 ng

    2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

    在第1步的反应管中直接加入2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus,用移液器轻轻吹打混匀。

    组分

    使用量

    第1步的反应液

    10 μL

    2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus

    10 μL

    3. 逆转录程序设置

    将上述混合液按照下表程序进行孵育。

    温度

    时间

    25

    5 min

    42

    30 min

    85

    5 min

    】:逆转录温度:推荐使用42。对于GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到50

    4. 逆转录产物可立即用于qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。


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