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TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent
产品货号:10606ES60
产品规格:100 ml
产品价格:¥553
类别:RNA提取

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    TRIeasyTM Total RNA Extraction Reagent  TRIeasyTM 总RNA提取试剂

    10606ES60

    100 mL

    553.00


    产品描述

    TRIeasyTM Total RNA Extraction Reagent是一种适用于各种动植物、细菌组织、细胞的总RNA抽提试剂,具有极强的裂解能力,可在短时间内裂解细胞和组织样本,并有效抑制样本中RNA的降解,保持RNA的完整性。样品在该试剂中能够充分裂解,之后加入氯仿离心分层,形成上清层、中间层和有机层(鲜红色下层),RNA分布在上层水相中,收集上清层后,经异丙醇沉淀便可得到总RNA。提取的总RNA纯度高,基本不含蛋白质及基因组DNA,可直接用于Northern、点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RT-PCR、poly(A)+选择、RNA酶保护分析以及构建cDNA文库等多种分子生物学实验。

    此外,样品中的DNA和蛋白也能以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA,而在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。

    本品操作简单快速,所有操作可在一小时内完成。对少量的组织(50-100 mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1 g)和细胞(>107)均有较好的裂解效果。


    运输与保存方法

    冰袋运输。4℃避光保存,有效期一年。


    注意事项

    1. 本产品中含有苯酚,具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会引起中毒、灼伤及其他身体伤害。使用时应穿戴防护物,如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛时,应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。

    2. 请穿实验服并佩戴一次性手套操作,避免RNase污染

    3. 需自备氯仿、异丙醇(新开封或提取RNA专用)、75%乙醇 (DEPC处理水配制)、DEPC和DEPC处理水。

    4. 样品用Total RNA Extraction Reagent匀浆后,如果不加入氯仿进行下游实验,可先-70℃冻存,可保存一个月以上。

    5. RNA沉淀在75%乙醇中,4℃可保存1周,-20℃可保存1年。

    6. RNA半衰期比较短,易降解,建议抽提后尽快进行后续实验。

    参考用量

    1 每毫升Total RNA Extraction Reagent能够充分裂解的最大样本量

    样本类型

    样本使用量

    贴壁细胞

    10 cm2培养面积

    悬浮动植物细胞或酵母细胞

    5×106-1×107

    细菌

    107

    动物组织

    50-100 mg

    植物组织(多糖和多酚含量不高的)

    50-100 mg

    :过多的样本量可能会导致裂解不充分,并使产物纯度降低。

    操作流程

    1. 样品的处理


    1) 样品匀浆

    A. 贴壁细胞

    弃去培养液,直接往直径3.5 cm的培养板中加入1 mL Total RNA Extraction Reagent,覆盖并反复吹打裂解细胞。

    1. 依据培养板的面积而不是细胞的数量来决定Total RNA Extraction Reagent的所需量(每10 cm2 1 mL)。

    2. 加入Total RNA Extraction Reagent量不足时,会导致DNA污染。

    3. 贴壁细胞往往不能完全从培养瓶(皿)脱落,这并不意味着裂解不完全。此时,细胞膜实际已完全裂开,并释放RNA,继续后续实验即可。

    B. 悬浮细胞

    离心收集细胞沉淀,每5×106-1×107个细胞加入1 mL Total RNA Extraction Reagent,用移液器反复吹打。

    :加入Total RNA Extraction Reagent前应避免洗涤细胞,否则会增加mRNA降解的可能性。裂解某些酵母和细菌可能需要使用匀浆器。

    C. 动、植物组织

    -70℃冻存动物组织在液氮中充分研磨,按照表1加入适当量Total RNA Extraction Reagent混匀。或取新鲜动植物组织尽量剪碎,加入适当量Total RNA Extraction Reagent,匀浆仪进行匀浆处理。

    样品体积不要超过加入Total RNA Extraction Reagent体积的10%。

    2) 将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟以使核蛋白体完全解离。

    3) (可选)4℃,12000 g 离心10 min,取上清。

    :离心可去除样品中较多蛋白质、脂肪、多糖或肌肉,植物的块茎结节等。离心后的沉淀中包含有细胞外膜、多糖以及高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织样品时,上层是大量油脂应尽量去除,取澄清的匀浆液进行后续实验。

    2 总RNA提取
    1) 向上述裂解液中加入1/5体积氯仿(如每1 mL Total RNA Extraction Reagent加入0.2 mL氯仿)。盖紧离心管盖,剧烈震荡15 sec,室温静置2-3 min。

    2) 4℃,12000 g 离心10-15 min。

    1. 离心后混合物可分3层:上层无色水样层,中间层,下层红色有机苯酚氯仿层。RNA存在于水样层中。
           2. 上层容量约为所加Total RNA Extraction Reagent总量的50-60%。如加入1 mL Total RNA Extraction Reagent,上层水相约为500-600 μL。建议吸取400-500 μL,以防吸到中间层造成DNA污染。
           3. 有机相和中间层是蛋白和DNA,可用于后续抽提。
    3) 小心吸取上层水相至新离心管中,加入1/2体积异丙醇(如每1 mL Total RNA Extraction Reagent加入0.5 mL 异丙醇)。颠倒混匀后室温放置10 min。

    4) 4℃,12000 g 离心10 min。

    RNA沉淀在离心前通常不可见,离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。
    5) 小心弃去上清,加入等体积 75%乙醇(DEPC水配制,如每1 mL Total RNA Extraction Reagent加入1 mL 75%乙醇)。涡旋充分洗涤,并轻弹管底,让沉淀悬浮起来。

    6) 4℃,7500 g 离心5 min,弃上清,注意不要丢失RNA沉淀。

    :剩余的少量液体可短暂离心,然后用枪头吸出,注意不要吸到沉淀。

    7) 室温放置空气干燥5-10 min。加入30-100 μL 无RNase水溶解RNA,待完全溶解后,取少量检测,其余溶液-70℃保存。

    RNA沉淀不能彻底干燥,过分干燥会导致RNA溶解度降低。

    3 产物检测

    A. RNA完整性检测

    1) 取1 μL RNA加入适当RNA loading buffer,混匀。

    2) 进行电泳检测。若出现清晰的三条带,证明RNA完整性较好。

    B. RNA纯度检测

    检测260 nm,280 nm OD值,并计算A260/A280比值。纯的RNA的比值应在2.0左右。


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