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400-6111-883
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400-6111-883
Hifair™ Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit
产品货号:11119ES60
产品规格:100 T
产品价格:¥755.00
类别:逆转录酶

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  • 产品信息


    产品名称

    产品编号

    规格

    储存

    价格(元)

    Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit

    11119ES60

    100 T

    -20

    755.00


    产品描述

    Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit是基于Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase开发的试剂盒。与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高,可耐受高达50的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kbcDNA

    试剂盒中包含由总RNAmRNA合成高质量第一链cDNA所需的所有成分,并提供两种cDNA合成引物:Random Primers N6oligo (dT)18,合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。


    产品组分

    编号

    组分

    产品编号/规格

    11119ES60 (100 T)

    11119-A

    RNase free ddH2O

    1 mL

    11119-B

    5×Hifair® Ⅱ Buffer

    400 μL

    11119-C

    Hifair® Ⅱ Enzyme Mix

    200 μL

    11119-D

    Oligo (dT)18 (50 μM)

    100 μL

    11119-E

    Random Primers N6 (50 μM)

    100 μL

    】:15×HifairTM Ⅱ Buffer中包含dNTP2HifairTM Ⅱ Enzyme Mix中包含RNase inhibitor


    运输与保存方法

    冰袋运输。-20保存。


    注意事项

    1)反应液的配制应在冰上操作完成,操作过程应避免RNase污染;

    2) 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作

    第一链cDNA合成操作步骤

    1. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

    组分

    使用量

    RNase free ddH2O

    To 20 μL

    模板RNA

    Total RNA: 1 ng -5 μgmRNA:1 ng-500 ng

    5×Hifair® Ⅱ Buffer

    4 μL

    Random Primers N6 (50 μM)

    1 μL

    or Oligo (dT)18 (50 μM)

    or 1 μL

    or Gene Specific Primers (2 μM)

    or 1 μL

    Hifair® Ⅱ Enzyme Mix

    2 μL

    【可省略】:针对复杂模板,可将RNAH2O、反转录引物在65保温5 min 后,迅速冰上冷却。然后再加入Buffer和反转录酶。

    2. 逆转录程序设置

    温度

    时间

    25

    5 min

    42

    30 min

    85

    5 min

    】:1荧光定量实验可以只使用Random Primers N6;也可以1:1Oligo (dT)18混合使用,效果更好。

    2)逆转录温度:推荐使用42。对于高GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到50

    3)逆转录产物可以-20短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80保存,避免反复冻融。

    关于引物的选择

    1) 如果模板为真核生物来源,建议选择Oligo (dT)18 ,与真核生物mRNA3’ Poly A尾配对,可获得最高产量的全长cDNA

    2)原核生物RNA的反转录请选用Random Primers N6或者基因特异性引物。

    3Random Primers N6适用性较广,mRNArRNAtRNAsmall RNALncRNA等模板均可用Random Primers N6进行反转录。

    4使用Random primers N6,进行2 kb以下的cDNA合成时,Random primers N6的使用量为 1-2 μL2 kb 以上的cDNA合成时,Random primers N6 的使用量为0.4-1 μL


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