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产品名称: 5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU) 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)
  • 产品货号:40204ES60
  • 产品规格:100mg
  • 产品价格:
  • 类别:细胞增殖与毒性
   
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    产品名称

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    价格(元)

     

    5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU) 5-溴脱氧尿嘧啶核苷

     

    40204ES60

    100mg

    -20℃

    186.00

    40204ES80

    1g

    -20℃

    536.00

    40204ES90

    5g

    -20℃

    2136.00

    产品描述

    目前常用的细胞增殖标记物有4种,DNA聚合酶αDNA polymerase α),增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigenPCNA),Ki-675-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)。其中Brdu为组织细胞非内源性表达存在,应用相对较广。Brdu,也称为溴化去氧尿苷,一种合成的胸苷类似物,在S期可替代胸腺嘧啶核苷选择性结合到细胞DNA从而检测细胞DNA合成和标记细胞分裂,凋亡等行为。在遗传研究中Brdu可通过活体注射或细胞培养加载,然后使用抗Brdu的单克隆抗体进行特异性标记,ICCIHC法染色法显示增殖细胞。另外,还能同时结合其它细胞标记物,双重染色,来判断增殖细胞的种类,增殖速度等,对研究细胞动力学有着重要意义。

    产品性质

    中文别名(Chinese Synonym

    5--1-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖)尿嘧啶;5-溴脱氧尿苷;溴化去氧尿苷;

    英文别名(English Synonym

    Br-dU; BUdR; 5-BrdU; 5-Bromodeoxyuridine;

    CAS号(CAS NO.

    59-14-3

    分子式(Formula

    C9H11BrN2O5

    分子量(Molecular Weight

    307.10

    外观(Appearance

    白色或类白色粉末

    熔点(Melting Point

    187-189

    纯度(Purity, HPLC

    99%

    溶解性(Solubility

    溶于1M 氢氧化铵(50 mg/ml),水(高达10 mg/ml);溶于DMFDMSO,水(加热)(50-100 mg/ml

    结构式(Structure

    运输和保存方法

    冰袋运输。-20℃干燥保存,2年有效。

    操作步骤

    1.Brdu储存液的准备

    用1X DPBS充分溶解适量的Brdu配置10 mg/ml的母液,过滤除菌后,按照0.5ml/管的量分装放在-20°C或者-80°C长期保存,避免反复冻融。Brdu储存液再融化后,4°C可稳定存放一周。

    2. 体内Brdu标记

    1)腹腔注射法(常用):无菌的10 mg/ml(溶于DPBS)适合用于体内注射用。按照100-200 μl(1-2 mg) Brdu的量腹腔注射到小鼠体内。注意:最短在注射后0.5 h后在小肠,胸腺和骨髓瘤处就能检测到Brdu。而一般在注射后24 h内几乎所有组织都能检测到Brdu。这个时间可能对于一些快速分化的组织如小肠来说有些久。

    2)根据自身的实验体系,在合适的时间点处死动物,摘除待研究的组织。使用冰冻切片或者石蜡包埋的方法进行组织处理和切片制备。然后进入后续的IHC染色步骤。

    3. 体外Brdu标记(培养原代细胞或者细胞系)

    注:总的来说,10 μM Brdu(稀释于培养液)是一个比较合适的方法用来标记不同物种来源的原代细胞或细胞系。当然,建议针对具体的实验体系优化方法。

    1)在96孔板上按标准步骤进行细胞培养,培养时间一般为1-72 h;

    2)Brdu工作液的准备:用组织细胞培养液按照1:30的比例稀释储存液得到1mM Brdu工作液。然后取10 μl 1 mM Brdu溶液直接加入1 ml组织培养液即得到最终工作液。37°C温热。

    3)按100 μl/孔Brdu工作液的量进行细胞标记,37°C孵育60 min~过夜。同时设置非Brdu标记的细胞作为阴性对照。注意:最佳的孵育时间取决于细胞增殖速度以及需要达到的实验目的。比如,对于快速增殖细胞(如HL-60)有效孵育时间为30-45min;对于原代细胞(如未受外源刺激培养的外周血淋巴细胞)孵育时间可能需要24 h。细胞密度最好不要超过2x106 cells/ml。

    4)制备单细胞层玻片,使用以下任何一种方法:

    a.细胞离心涂片(cytospin)制备:使用细胞离心涂片机,将100μl标记好的细胞(浓度为:1-2 x106 cells/ml)直接离心到干净,无脂肪,poly-L-lysin包被的玻片上,风干。

    b.细胞涂片(cell-smear)制备:取一小滴标记好的细胞悬液于干净,无脂肪,poly-L-lysin包被玻片的一端,然后用第二个干净玻片将其均匀涂布成一薄层。室温风干。

    5)将玻片置于70%冰乙醇放在-20°C下固定20-30 min。

    6)PBS清洗细胞3次,每次5min。

    7)加入1.5M HCl中室温孵育30 min。注意:DNA的变性对于Brdu染色的成功至关重要。

    8)吸去HCl,PBS清洗2次,每次5min。

    9)进入后续ICC染色步骤。

    4.体外Brdu标记(组织薄片)

    1)Brdu工作液的准备:用组织细胞培养液按照1:30的比例稀释储存液得到1mM Brdu工作液。然后取10 -20 μl 1 mM Brdu溶液直接加入1 ml组织培养液即得到最终工作液。确保有足够的工作液(37°C温热)完全浸泡组织。

    2)用手术刀或者锋利的刀片将组织切割成约1 mm厚,2 mm2大小的薄片。建议在温热的培养基内进行切片,利于维持组织的活力。

    3)转移组织薄片至预装有10 ml Brdu标记液的15 ml离心管内。于37°,CO2 培养箱内孵育需要的时间。孵育时间可变,取决于组织薄片类型以及需要达到的实验目的(常用的为2-4 h)。直接丢弃未用完的标记液。

    4)37°C PBS清洗组织薄片,每次5 min。

    5)使用标准的冰冻切片或者石蜡包埋切片的方法固定组织。

    注意事项

    1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    2)该品对肌体有不可逆损伤的可能性。使用时应穿防护服和戴手套。应避免吸入本品的粉尘。