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产品名称: Cell Counting Kit (CCK-8) CCK-8试剂盒
  • 产品货号:40203ES60
  • 产品规格:100T
  • 产品价格:
  • 类别:细胞增殖与毒性
   
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    产品名称

    产品编号

    规格

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    价格(元)

    促销价格(元)

    Cell Counting KitCCK-8CCK-8试剂盒

    40203ES60

    100T (1 mL)

    4℃

    150.00

    150.00

    Cell Counting KitCCK-8CCK-8试剂盒

    40203ES76

    500T (5 mL)

    4℃

    480.00

    480.00

    Cell Counting KitCCK-8CCK-8试剂盒

    40203ES80

    1000T (10 mL)

    4℃

    920.00

    897.00

    Cell Counting KitCCK-8CCK-8试剂盒

    40203ES88

    3000T (30 mL)

    4℃

    1833.00

    1687.00

    Cell Counting KitCCK-8CCK-8试剂盒

    40203ES92

    10000T (100 mL)

    4℃

    5122.00

    4897.00

    检测原理

    Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

    WST-8属于MTT的升级产品,工作原理为:在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。

    CCK-8法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

    保存条件

    4℃干燥避光保存,有效期一年(推荐)。-20℃干燥避光保存,有效期二年。

    CCK-8方法的优势

    1)表1 CCK-8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较

    检测方法

    MTT

    XTT

    WST-1

    CCK-8

    甲臜产物的水溶性

    差(需加有机溶剂溶解后再检测)

    产品性状

    粉末

    2瓶溶液

    溶液

    1瓶溶液

    使用方法

    配成溶液后使用

    现配现用

    即开即用

    即开即用

    检测灵敏度

    很高

    很高

    检测时间

    较长

    较短

    较短

    最短

    检测波长

    560-600 nm

    420-480 nm

    420-480 nm

    430-490 nm

    细胞毒性

    高,细胞形态完全消失

    很低,细胞形态不变

    很低,细胞形态不变

    很低,细胞形态不变

    试剂稳定性

    一般

    较差

    一般

    很好

    批量样品检测

    可以

    非常适合

    非常适合

    非常适合

    便捷程度

    一般

    便捷

    便捷

    非常便捷

    2)酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰;

    3)细胞毒性非常低,因此加入WST-8显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间。

    注意事项

    1)建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。

    2)有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK-8试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基液面下加,容易产生气泡,会干扰OD值读数。

    3)白细胞可能需要培养较长时间。

    4)如果没有450 nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。

    5)培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

    6)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    CCK-8试剂盒操作说明

    . 制作标准曲线(测定细胞具体数量)

    1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。

    2、按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议3-6个复孔。

    3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK-8试剂培养1-4h后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。)

    【注】当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 /(100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 /(100 μL 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

    . 细胞活性检测

    1、在96孔板中接种细胞悬液(100 μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃5% CO2)。

    2、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

    3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

    4、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

    5若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1MHCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

    . 细胞增殖-毒性检测

    1、在96孔板中配制100 μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时(37℃5% CO2)。

    2、向培养板中加入10 μL不同浓度的待测物质。

    3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6122448小时)。

    4、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

    5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

    6、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

    7、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1MHCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

    【注】如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

    活力计算

    细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A0加药)-A(空白)] ×100
    A(加药):具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度
    A(空白):具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度
    A0加药):具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
    *细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力