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产品名称: MTT 噻唑兰
  • 产品货号:40201ES72
  • 产品规格:250mg
  • 产品价格:
  • 类别:细胞增殖与毒性
   
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    价格(元)

    MTT 噻唑兰

    40201ES72

    250mg

    4避光

    186.00

    MTT 噻唑兰

    40201ES80

    1g

    4避光

    356.00

    产品描述

    噻唑兰(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT),也称作溴化噻唑蓝四氮唑,是一种黄色染料,已经普遍替代传统的台盼蓝染色法或者放射性同位素插入法,用来检测细胞的活力,细胞增殖以及细胞毒性分析。检测原理在于:MTT是一种可接受氢离子的化合物染料,带正电荷,具有细胞膜渗透性。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源进入的MTT还原成为水不溶性的深蓝色MTT-甲臜结晶,而死细胞不具有此功能。甲臜结晶是不能穿透细胞膜,因此沉积在处于增殖且未受损伤的细胞内。甲臜结晶可用DMSO或者酸化的异丙醇溶解出来,酶标仪下测定570nm的吸光度反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量与活细胞数目成正比,用以评估细胞存活状况。

    MTT也可用作免疫组化/细胞化学染色试剂,也可用来检测NADMTT被快速还原成甲臜后,能够螯合镍,铜和钴。钴螯合物可参与机体氧化系统。

    产品性质

    中文别名(Chinese synonym

    溴化噻唑蓝四氮唑;

    3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑噻唑蓝;

    英文别名(English synonym

     3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium Bromide;

    Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide;

    Thiazoyl blue tetrazolium bromide;

    CAS号(CAS NO.

    298-93-1

    分子式(Formula

    C18H16N5SBr

    外观(Appearance

    淡黄色至橙色粉末

    分子量(Molecular weight

    414.3

    纯度(purity

    ≥98%

    熔点(Melting point

    187

    溶解性(Solubility

    溶于水,甲醇

    结构式(Structure

     

    运输和保存方法

    冰袋运输。4避光干燥保存。

    注意事项

    1溶解甲臜的有机溶剂具有毒性,使用时注意防护。

    2MTT有致癌性,应小心操作;MTT溶液需要无菌,因其对菌很敏感。MTT溶液不可4保存超过1周,因其可能发生降解,导致检测结果错误。

    3MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT吸光度最好在0-0.7范围内。

    4为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    使用方法(以96孔板为例)

    细胞生长的培养条件会影响检测结果,因此进行MTT检测时需考虑这些条件,包括:培养时间,传代次数以及生长培养基的成分等。一般情况,48-72h培养时间下,最初铺板的细胞密度可控制在5000-10,000/孔。

    【注】:最终检测的培养液内含有酚红会严重影响检测结果。推荐MTT检测时细胞培养在无酚红环境下。也可以在进行MTT孵育的时候改用无酚红培养液。

    A.工作液配制

    1MTT溶液

    生化研究中,常配制成5mg/mL的储备液。MTT最好现配现用,可以称取MTT 0.5 g,溶于100 mL的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中,用0.22 μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,4 避光短时间保存。建议小剂量分装放到-20长期保存,避免反复冻融。

    2SDS-HCl溶液(MTT终止液)

    10 mL 0.01 M HCl加入1 g SDS,颠倒混匀或者超声使其完全溶解,此时即为终止液。建议现配现用。

    BMTT细胞增殖检测

    1接种细胞:用含10%胎牛血清(FBS)的培养液配制成单个细胞悬液,调整细胞密度,以每孔5000-10, 000个细胞接种到96孔板,每孔体积100 µL,培养板的边缘孔用无菌PBS填充。设置空白对照孔(不含有细胞)。

    1375% CO2,培养24-72 h

    2可选:对于贴壁细胞,去除旧的培养液,更换100 µL/孔新鲜的培养液(不含酚红);对于悬浮细胞,离心96孔板,去除尽可能多的上清液。然后加入 100 µL/孔新鲜的培养液(不含酚红)重悬细胞;

    3每孔加入10 µL MTT溶液(5 mg/mL),加样时尽量勤换枪头,控制加量误差。

    4水平摇床上低速混匀1 min后,放入37培养箱孵育4h。【注】:对于高密度的细胞(>100,000 cells/)可缩短孵育时间至2 h

    5对于贴壁细胞,直接吸掉旧的培养液,避免枪尖刮破单细胞层。对于悬浮细胞,离心收集细胞,去除培养液。

    6加入100 µL/SDS-HCl溶液,用枪充分混匀后放入37培养箱孵育4 h。【注】:更长的孵育时间会降低检测灵敏度。

    7孵育结束,放置在酶标仪上摇匀后,选择570 nm,测定吸光度。记录结果,比色以空白调零。

    【注】:对于细胞毒性检测,以未经药物处理细胞的OD值为100%,然后计算药物处理细胞所占的比率(x),公式如下:OD(未处理细胞)/OD(药物处理细胞)=100%/x。然后建立直方图。

     

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