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产品名称: Super ECL Detection Reagent ECL化学发光超敏显色试剂盒
  • 产品货号:36208ES60
  • 产品规格:100mL
  • 产品价格:
  • 类别:Western Blot
   
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    价格(元)

    Super ECL Detection Reagent ECL化学发光超敏显色试剂盒

    36208ES60

    100ml

    4℃,避光

    395.00

    36208ES76

    500ml

    4℃,避光

    1655.00

     产品描述

    ECL化学发光超敏显色试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶(HRP)的抗体及其关联的抗原。其原理是,蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上,以一抗及HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白,或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制的ECL工作液,室温孵育膜数分钟,将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒。然后转入暗室将X光胶片压在膜上曝光数秒到数小时,显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光胶片上。

    本试剂盒采用了独特的发光底物系统,降低曝光背景的同时引入新型的氧化剂,大大提高试剂盒的稳定性,使其在室温能稳定放置一年。除用于X光片,还可直接使用荧光CCD扫描,主要用于WB检测以及化学发光免疫检测系统。

    产品特点

    1)具有极高灵敏度和高信噪比,可检测10100 fg抗原;

    2)发光迅速,亮度强,可在日光灯下观察到印迹膜条带;

    3)持续发光时间长,荧光可使X光胶片感光达12小时以上,特别适用于痕量蛋白或核酸检测;

    4)可使用更高的抗体稀释倍数(1:20001:10000),大大节省抗体。

    产品组分

    组分编号

    组分名称

    产品编号/规格

    36208ES60100ml

    36208ES76500ml

    36208ES801000ml

    36208-A

    A

    50ml

    250ml

    500ml

    36208-B

    B

    50ml

    250ml

    500ml

    运输与保存方法

    常温运输。

    频繁使用可置于室温避光保存,一年稳定;长期不用,建议置于4 ºC保存延长效期。

    操作方法

    1. 执行常规电泳、转膜、HRP标记抗体或者HRP标记核酸探针孵育、洗膜。

    【注】:ECL发光液是HRP的显色底物,因此检测系统最终必须基于HRP酶标记抗体或者核酸探针。

    2. 最后一次洗膜的同时,新鲜配制发光工作液:分别取等体积的A液和B液,混匀后,室温放置备用。

    【注】:取A液和B液一定要用不同的枪头;另建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。

    3. 用平头镊取出膜,搭在滤纸上沥干洗液,勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液(100~200μl发光工作液/cm2膜)中,与发光工作液充分接触。室温孵育3分钟,准备立即压片曝光。

    【注】:孵育时间过长不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应,使用过少的发光工作液不利反应进行,也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小,但勿降低发光液使用比例。

    4. 用平头镊子夹起膜,膜的下缘轻轻接触吸水纸,去除膜上多余的液体,留下少量工作液,不可让膜完全干燥。

    5. X光胶片暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将印迹膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹印迹膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的保鲜膜固定在暗盒内,蛋白带面向上。

    6. 暗房内取一张X光胶片至于包裹的膜上,压片,分别曝光不同的时间,如数秒到数分钟,定影显影冲洗。【注】:曝光时间需根据曝光强度做相应的调整。若是背景过高,可使用两张X光胶片同时压片。

    注意事项

    1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    2)步骤15可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印,保持膜的干净。

    3)长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。

    4)发光工作液孵育约3分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光,因此弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL发光和曝光。

    5)由于发光液灵敏度高,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:10001:4000,二抗1:20001:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败。

    6)某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。

    7)避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。

    8)使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。

    9)使用生物素-亲和素系统,避免使用牛奶封闭,可能会导致背景过高。

    10)金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点,避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子,建议使用塑料的平头镊子。

    11)叠氮化钠(NaN3)能抑制HRP活性,若回收HRP标记探针或者抗体应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%

    12)本品无特殊毒性,按普通化学品处理。

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