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产品名称: Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit 增强型ECL化学发光检测试剂盒
  • 产品货号:36222ES60
  • 产品规格:100ml
  • 产品价格:
  • 类别:Western Blot
   
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    产品名称

    产品编号

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    价格(元)

    Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit增强型ECL化学发光检测试剂盒

    36222ES60

    100ml

    4

    325.00

    36222ES76

    500ml

    4

    1255.00

    产品描述

    增强型ECL化学发光检测试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶(HRP)的抗体及其关联的抗原。其原理是,蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上,以一抗及HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白,或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制的ECL工作液,室温孵育膜数分钟,将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒。然后转入暗室将X光胶片压在膜上曝光数秒到数小时,显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光胶片上。

    本试剂盒采用了独特的发光底物系统,降低曝光背景的同时引入新型的氧化剂,大大提高试剂盒的稳定性,使其在室温能稳定放置一年。除用于X光片,还可直接使用荧光CCD扫描,主要用于WB检测以及化学发光免疫检测系统。

    产品组分

    组分编号

    组分名称

    产品编号/规格

    36222ES60(100ml

    36222ES76500ml

    36222ES801000ml

    36222-A

    A

    50ml

    250ml

    500ml

    36222-B

    B

    50ml

    250ml

    500ml

    运输与保存方法

    常温运输。

    频繁使用可置于室温保存,一年稳定;长期不用,建议置于4 ºC保存延长效期。【注】:A液(36222-A)需避光保存!

    操作方法(以X光胶片为例)

    1. 执行常规电泳、转膜、HRP标记抗体或者HRP标记核酸探针孵育、洗膜。

    【注】:ECL发光液是HRP的显色底物,因此检测系统最终必须基于HRP酶标记抗体或者核酸探针。

    2. 最后1次洗膜的同时,新鲜配制发光工作液(推荐100~200μl发光液/cm2膜):分别取等体积的A液和B液,混匀备用。

    【注】:取A液和B液一定要用不同的枪头;另建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。

    3. 用平头镊取出膜,搭在滤纸上沥干洗液,勿使膜完全干燥。用移液器将工作液加到膜上,使之充分接触。室温孵育1-2分钟,准备立即压片曝光。

    4. 用平头镊子夹起膜,膜的下缘轻轻接触吸水纸,去除膜上多余的液体,留下少量工作液,不可让膜完全干燥。

    5. X光胶片暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将印迹膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹印迹膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的保鲜膜固定在暗盒内,蛋白带面向上。

    6. 暗房内取一张X光胶片至于包裹的膜上,压片,曝光30s-2min,显影定影冲洗。【注】:曝光时间需根据曝光强度做相应的调整。若是背景过高,可使用两张X光胶片同时压片。

    其他曝光方法

    如果使用CCD拍照:可以将膜放置于工作液中,开机后按照使用说明,将膜取出,进行拍照。另外,也可以根据情况,调整机器测量参数,提高信噪比。


     

    注意事项

    1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    2)转膜、封闭、孵育都需要避免气泡,另外戴手套可以避免在膜上留下手印,保持膜的干净。

    3)长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。

    4)某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。

    5)避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。

    6)使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。

    7)使用生物素-亲和素系统,避免使用牛奶封闭,可能会导致背景过高。

    8)金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点,避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子,建议使用塑料的平头镊子。

    9)叠氮化钠(NaN3)能抑制HRP活性,若回收HRP标记探针或者抗体应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%

    10)本品无特殊毒性,按普通化学品处理。

    问题与解决方案

    遇到的问题

    原因分析

    推荐解决方法

    胶片无条带显现或者信号较弱

    转膜的效率低

    提高转膜效率,用预染Marker判断。

    抗原/抗体量少或不匹配

    增加抗原/抗体量或选择合适抗原/抗体

    X光胶片有问题

    曝光后X光谱全黑(而非透明色),则表明胶片已完全曝光,使用新的X光片

    显影/定影液有问题

    可预先曝光一张胶片进行判断,如有问题当换用新的显影/定影液

    反应系统中HRP量过多

    稀释HRP标记物

    X光片背景脏

    一抗二抗浓度太高

    降低抗体浓度,延长封闭时间

    抗体未清洗干净

    增加洗膜次数

    条带有空斑

    抗原以及二抗的浓度过高

    稀释样品重新跑胶,也可将混合好的显色液冰浴后,加到膜上即刻快速显色。

    带型不规则

    转膜有气泡或甲醇(对于PVDF膜)水化不均匀

    优化转膜条件。

     

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