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产品名称: Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit
  • 产品货号:11145ES50
  • 产品规格:50 T
  • 产品价格:
  • 类别:逆转录PCR(RT-PCR)
   
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    产品名称

    产品编号

    规格

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    价格(元)

    Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit

    11145ES50

    50 T

    -20℃避光保存

    1126.00

    Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit

    11145ES70

    200 T

    -20℃避光保存

    4126.00

    产品描述

    Hifair®  One Step RT-PCR Probe Kit是以RNA为模板进行定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。本试剂盒以RNA为模板,使用基因特异性引物,利用耐热Hifair®  Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA,并搭配使用探针和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase,配合优化的缓冲体系能够特异灵敏的对RNA模板进行精确定量。

    本试剂盒以预混的Mix形式提供,2×Hifair®  P buffer包含优化的缓冲体系和dNTPs等,优化了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子,适用于荧光标记探针的高特异性检测系统。此外,Hifair® UH  Enzymes包含比例优Hifair®  Reverse TranscriptaseRNase inhibitorUNICON® HotStart Taq DNA Polymerase等。

    产品组分

    组分编号

    组分名称

    产品编号/规格

    11145ES50 (50 T)

    11145ES70 (200 T)

    11145-A

    2×Hifair®  P buffer

    500 μL

    1 mL×2

    11145-B

    Hifair® UH  Enzymes

    50 μL

    200 μL

    11145-C

    Hieff® 50×High Rox

    20 μL

    80 μL

    11145-D

    Hieff® 50×Low Rox

    20 μL

    80 μL

    11145-E

    RNase free ddH2O

    500 μL

    1 mL×2

    【注】P bufferProbe buffer的简写,UHUNICON-Hifair的简写

    适用机型

    High Rox适用机型 ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus

    Low Rox 适用机型 ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex

    Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P

    不需要Rox校正的仪器型号

    Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™

    Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000

    Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96

    Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR

    运输与保存方式

    冰袋运输。-20避光保存,有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。

    注意事项

    1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

    2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


    反应体系(以20 μL为例)

    组分

    加入量

    终浓度

    2×Hifair®  P buffer

    10 μL

    Hifair® UH  Enzymes

    1 μL

    -

    Hieff® 50×High Rox or Low Rox

    0.4 μL

    -

    Gene Specific Primer Forward (10 µM)

    0.4 μL

    0.2 μM

    Gene Specific Primer Reverse (10 µM)

    0.4 μL

    0.2 μM

    TaqMan Probe (10 µM)

    0.2 μL

    0.1 μM

    模板RNA

    Total RNA: 1 pg-1 µg

    -

    RNase free ddH2O

    to 20 μL

    -

    【注】:a) 所有试剂使用前应充分混匀

    b) 参比染料:Rox的添加,可根据不同仪器型号进行选择,具体可参考【适用机型】。

    c) 引物浓度通常引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况0.1-1.0 μM之间进行调整。

    d) 探针浓度:探针终浓度可在50 nM-250 nM之间调整。

    e) 体系配制:请于超净工作台内配制,使用无核酸酶残留的枪头、反应管推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

    f) 模板稀释一步法qRT-PCR灵敏度极高推荐将模板稀释后(如稀释至2-5 μL/样本)加入反应体系中,这样可以有效提高实验的重复性。

    g) 反应体系:建议以大体系进行实验,如20 μL50 μL

    标准扩增程序

     

    反应阶段

    温度

    时间

    循环数

    1

    逆转录

    50a

    15 minb

    1

    2

    预变性

    95

    30 sec

    1

    3

    扩增反应

    95

    10 sec

    45 cycles

    60

    30 secc

    【注】 a) 对于含复杂二级结构或高GC含量的RNA模板,可将逆转录温度提高到55℃,有助于提升扩增效率和灵敏度。

    b) 逆转录时间可以根据模板的复杂程度进行调整,时间为5min时可满足大多数基因的鉴定。

    c) 不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。

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