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产品名称: HiSep DEAE Agarose Resin 6FF DEAE弱阴离子高速交换树脂
  • 产品货号:20540ES25
  • 产品规格:25ml
  • 产品价格:
  • 类别:蛋白表达与纯化
   
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    HiSep DEAE Agarose Resin 6FFHiSep DEAE弱阴离子高速交换树脂)

    20540ES25

    25ml

    4

    258.00

    HiSep DEAE Agarose Resin 6FFHiSep DEAE弱阴离子高速交换树脂)

    20540ES60

    100ml

    4

    648.00

    HiSep DEAE Agarose Resin 6FFHiSep DEAE弱阴离子高速交换树脂)

    20540ES75

    300ml

    4

    1538.00

    产品描述

    离子交换树脂主要包括强酸性阳离子交换树脂、弱酸性阳离子交换树脂、强碱性阴离子交换树脂和弱碱性阴离子交换树脂4种,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。

    本品DEAE弱阴离子交换树脂以高度交联的6%琼脂糖为介质,可耐受较高的流速及更高的化学稳定性,适合实验室及工业大规模纯化。本品离子交换基团-O-CH2CH2-N (C2H5)2

    产品性质

    基质(Matrix

    高度交联的6%琼脂糖微球

    粒径(Bead size

    45-165µm

    离子交换类型(Type

    弱阴离子

    载量(Capacity

    0.11-0.16mmol Cl-/ml 基质

    流速(Flow Rate

    300-600cm/h

    pH范围(pH Range

    2-12

    储存缓冲液(Buffer

    20%乙醇

    运输和保存方法

    冰袋运输。4保存,有效期2年。

    使用方法

    1 缓冲液的准备

    所用水和Buffer在使用前最好用0.22µm0.45µm滤膜过滤。

    2 样品准备

    样品在使用前最好用0.22µm0.45µm滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

    3 装柱(使用储液器装填)

    1)用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头,确保柱底筛板上无气泡,关闭柱底出口,并在柱底部留出1-2cm的去离子水。

    2)将树脂悬浮起来,小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。

    3)如果使用储液器,应立即在层析柱和储液器中加满水,将进样分配器放置于浆液表面,连接至泵上,避免在分配器或进样管中产生气泡。

    4)打开层析柱底部出口,开起泵,使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱,然后缓慢增加至最终流速, 这样可避免液压对所形成柱床的冲击,也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速,可以用你所使用泵的最大流速, 这样也可以得到一个很好的装填效果(【注】:在随后的色谱程序中,不要超过最大装柱流速的75%)。当柱床高度稳定后,在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。

    5)关闭泵,关闭层析柱出口。

    6)如果使用储液器,去除储液器,将分配器至于层析柱中。

    7)将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器,锁紧分配器接头。

    8)将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中,开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。

    4 样品纯化

    1)将介质装入合适的层析柱,层析用5倍柱体积的结合Buffer进行平衡,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

    2)将样品加到平衡好的HiSep DEAE Agarose Resin 6FF中(保证目的蛋白与Resin充分接触,提高目的蛋白的回收率),收集流出液。

    3)用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。

    4)使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer,收集洗脱液,即目的蛋白组分。

    5)依次使用3倍柱体积的结合Buffer5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。

    5  SDS-PAGE 检测

    将得到的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品使用SDS-PAGE 检测纯化效果。

    6 填料清洗

    离子交换树脂每次使用后可以用1M NaCl 甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗,然后用至少5倍柱体积的Buffer 进行平衡至离子强度或pH值稳定。

    CIPCleaning In Place)清洗

    离子交换树脂可以重复使用而无需再生,但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,这时可按照下面方法对树脂进行清洗。

    1)去除一些沉淀或变性物质

    2倍柱体积的1M NaOH 溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。

    2)去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

    3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100 清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。

    3)去除一些离子键结合物质

    3-4倍柱体积的2M NaCl清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。

    注意事项

    1)请勿冷冻保存本产品。

    2Resin使用前一定要充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。

    3)所有操作过程中,样本需要在4或冰上操作。

    4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    附表 问题及解决方案

    问题

    可能原因

    推荐解决方案

    柱子反压过高

    填料被堵塞

    按照【填料清洗】部分对树脂进行清洗。

    样品中含有微小的固体颗粒,建议使用前用0.22µm0.45µm滤膜过滤。

    洗脱样品较杂

    树脂重复多次使用

    按照【填料清洗】部分对树脂进行清洗或更换新树脂。

    平衡不充分

    增加平衡液体积,确保树脂充分平衡/洗杂。

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    产品编号

    产品名称

    规格

    价格元

    20540ES25

    HiSep DEAE Agarose Resin 6FF HiSep DEAE弱阴离子高速交换树脂)

    25ml

    258.00

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    HiSep DEAE Agarose Resin 6FF HiSep DEAE弱阴离子高速交换树脂)

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    648.00

    20540ES75

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