7×24小时 服务热线:400-6111-883  翊圣微信:
产品名称: MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 5ML (MBP标签蛋白纯化预装柱,5ML)
  • 产品货号:20517ES03
  • 产品规格:5ml
  • 产品价格:
  • 类别:蛋白表达与纯化
   
  • 产品简介
  • 实验数据
  • 文档资料
  • 相关产品
  • 论文发表
  •  产品信息

    产品名称          

    产品编号

    规格

    储存

    价格(元)

    MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 5ML

    MBP标签蛋白纯化预装柱,5ML

    20517ES03

    5ml

    4

    1238.00

    MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 5ML

    MBP标签蛋白纯化预装柱,5ML

    20517ES25

    5×5ml

    4

    3958.00

    产品描述

    MBPSep Dextrin Agarose Resin是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白(MBP)标签蛋白的亲和层析介质,MBP可促进连接蛋白的正确折叠,增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步纯化MBP融合蛋白,结合的融合蛋白可以用10mM麦芽糖进行温和洗脱,保护了目的蛋白的活性,MBP融合部分后续可用位点特异性蛋白酶切除。

    此外,MBPSep Dextrin Agarose Resin6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质,具有更高的物理化学特性,可以耐受更高的压力,在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化,更适于工业大规模蛋白的纯化。

    MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 5ML是装填了MBPSep Dextrin Agarose Resin6FF的一种中压预装柱,规格5ml,预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA 等,方便客户操作。

    产品性质

    基质(Matrix

    高度交联的6%琼脂糖微球

    配体(Ligand

    糊精

    孔径(Bead size

    45-165µm

    载量(Capacity

    10mg MBP蛋白(80kDa

    最大压力(PressureMax

    0.3 MPa, 3bar

    pH稳定范围(pH range

    3-12

    储存缓冲液(Buffer

    20%乙醇

    运输和保存方法

    冰袋运输。4保存,有效期2年。

    需准备试剂

    所用水和Buffer在使用前最好用0.22µm0.45µm滤膜过滤除菌。

    结合/洗杂缓冲液20 mM Tris-HCl, 200mM NaCl, 1mM EDTA, pH7.4

    洗脱缓冲液20mM Tris-HCl, 1mM EDTA10mM 麦芽糖, pH7.4

    【注】:结合/洗杂缓冲液或者洗脱缓冲液中可加入1mM DTT10mM β-巯基乙醇。

    使用方法

    【注】样品在上样前最好用0.22µm0.45µm滤膜过滤,减少杂质以防阻塞柱子。

    1样品纯化(以Akta为例)

    1准备:将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。

    2清洗3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。

    3平衡:5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

    4上样:将样品加到平衡好的层析柱中,推荐流速1-5ml/min,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。

    【注】:样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。

    5洗杂:10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,直到紫外吸收达到一个稳定的基线,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液,待检测。

    6洗脱:用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。

    7清洗及保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。

    2 SDS-PAGE检测

    将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。

    3 填料清洗

    随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集,会造成流速和结合载量性能下降,此时需对填料进行清洗。

    13倍柱体积的去离子水;

    23倍柱体积的0.1%SDS0.5M NaOH溶液;

    33倍柱体积去离子水;

    43倍柱体积20%乙醇,保存于4

    注意事项

    1)请勿冷冻保存本产品。

    2)所有操作过程中,样本需要在4或冰上操作。

    3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


    附表 问题及解决方案

    问题

    可能原因

    推荐解决方案

    柱子反压过高

    填料被堵塞

    清洗树脂。

    裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上样前最好用0.22µm0.45µm滤膜过滤,或离心去除。

    洗脱组分中无目的蛋白

    目的蛋白未表达

    优化实验方案,确保目的蛋白表达

    样品或缓冲液中存在一些干扰因素如非离子去污剂

    样品透析或用结合buffer稀释

    细胞产生大量的淀粉酶影响结合力

    培养基中添加葡萄糖,抑制淀粉酶的表达

    融合蛋白使麦芽糖结合位点阻塞或扭曲影响了目的蛋白的结合力

    更换载体

    柱子结合时间太短 

    将样品与树脂振荡孵育42h或更长时间 

    洗脱样品较杂

    目的蛋白降解

    加一些蛋白酶抑制剂,如PMSFEDTA

    平衡/洗杂不充分

    增加平衡液体积,确保树脂充分平衡/洗杂。

    相关产品

    产品编号

    产品名称

    规格

    价格(元)

    20515ES08

    MBPSep Dextrin Agarose Resin  6FF MBP标签蛋白高度交联纯化树脂)

    5ml

    858.00

    20515ES25

    MBPSep Dextrin Agarose Resin  6FF MBP标签蛋白高度交联纯化树脂)

    25ml

    2958.00

    20516ES03

    MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1MLMBP标签蛋白纯化预装柱,1ML

    1ml

    358.00

    20516ES08

    MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1MLMBP标签蛋白纯化预装柱,1ML

    5×1ml

    1258.00

    60126ES02

    EDTA, Free Acid 乙二胺四乙酸 

    500g

    200.00

    60127ES02

    EDTA Disodium Salt Dihydrate 乙二胺四乙酸二钠盐二水 

    500g

    180.00

    20311ES10

    DTT 二硫苏糖醇

    10g

    280.00

    60102ES76

    Tris Base (羟甲基)氨基甲烷

    500g

    108.00