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产品名称: BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 1ML 生物素分子纯化预装柱,1ML
  • 产品货号:20513ES03
  • 产品规格:1ml
  • 产品价格:
  • 类别:蛋白表达与纯化
   
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    产品名称          

    产品编号

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    价格(元)

    BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 1ML

    生物素分子纯化预装柱,1ML

    20513ES03

    1ml

    4

    428.00

    BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 1ML

    生物素分子纯化预装柱,1ML

    20513ES08

    5×1ml

    4

    1328.00

    产品描述

    Streptavidin Agarose Resin 6FF是一种生物素或生物素化的蛋白、抗体等物质的纯化树脂,其作用原理是基于链霉亲和素与生物之间的相互作用,将链霉亲和素高度交联于6%琼脂糖上,独特的制备工艺使其具有更高的物理化学特性,可以耐受更高的压力,在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化,更适于工业大规模蛋白的纯化。

    由于链霉亲和素与生物之间的亲和力很强,纯化时需要在变性条件下洗脱;而链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱,可以在 pH9.5-11.0 结合,pH4.0 时洗脱,不需要使用变性剂,所以能更好的保持亲和素偶联物的活性。

    BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 1ML是装填了Streptavidin Agarose Resin 6FF的一种中压预装柱,规格1ml,预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA 等,方便客户操作。

    产品性质

    基质(Matrix

    高度交联的6%琼脂糖微球

    配体(Ligand

    链霉亲和素

    孔径(Bead size

    45-165µm

    载量(Capacity

    200nmol Biotin/ml 介质

    最大压力(PressureMax

    0.3 MPa, 3bar

    pH稳定范围(pH range

    2-10

    储存缓冲液(Buffer

    20%乙醇

    运输和保存方法

    冰袋运输。4保存,有效期2年。

    需准备试剂

    所用水和Buffer在使用前最好用0.22µm0.45µm滤膜过滤除菌。

    生物素或生物素化物质的纯化

    结合/洗杂缓冲液:150mM NaCl, 20mM NaH2PO4, pH7.4

    洗脱缓冲液:8M 盐酸胍,pH1.5

    亚氨基生物素标签物质的纯化

    结合/洗杂缓冲液:50mM碳酸铵,0.5M NaCl, pH10.0

    洗脱缓冲液:50mM碳酸铵,0.5M NaCl, pH4.0

     

     

     

    使用方法

    【注】样品在上样前最好用0.22µm0.45µm滤膜过滤,减少杂质以防阻塞柱子。另外,确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。

    1样品纯化(以Akta为例)

    1准备:将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。

    2清洗3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。

    3平衡:5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

    4上样:将样品加到平衡好的层析柱中,推荐流速1ml/min,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。

    【注】:样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。

    5洗杂:10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,直到紫外吸收达到一个稳定的基线,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液,待检测。

    6洗脱:用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。

    7清洗及保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。

    2 SDS-PAGE检测

    将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。

    3 填料清洗

    随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集,会造成流速和结合载量性能下降,此时需对填料进行清洗。

    1)去除一些沉淀或变形物质

    2倍柱体积的0.1M NaOH6M盐酸胍或8M尿素溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBSpH7.4清洗。

    2)去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

    3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% Triton X-100清洗,然后立即用5倍柱体积的PBSpH7.4清洗。

    注意事项

    1)请勿冷冻保存本产品。

    2)所有操作过程中,样本需要在4或冰上操作。

    3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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    产品编号

    产品名称

    规格

    价格(元)

    20512ES08

    Streptavidin Agarose Resin 6FF 链霉亲和素琼脂糖纯化树脂

    5ml

    938.00

    20513ES03

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    1ml

    428.00

    20513ES08

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