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产品名称: Hieff™ Taq DNA Polymerase DNA聚合酶
  • 产品货号:10101ES80
  • 产品规格:1000U
  • 产品价格:
  • 类别:常规PCR
   
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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    HieffTM Taq DNA Polymerase DNA聚合酶

    10101ES80

    1000 U

    155.00

    HieffTM Taq DNA Polymerase DNA聚合酶

    10101ES90

    5×1000 U

    735.00

    产品描述

    HieffTM Taq DNA Polymerase是嗜热性Thermus aquaticus表达的热稳定重组型DNA聚合酶,分子量为94 KD。具有5’→3’聚合酶活性和5’→3’外切酶活性,无3’→5’外切酶活性。扩增产物具有3′-dA,可直接用于TA克隆。

    产品组分

    编号

    组分

    产品编号/规格

    1000 U

    10101ES905×1000 U

    10101-A

    10×Taq Buffer (Mg2+ Free)

    1 mL×4

    1 mL×20

    10101-B

    25 mM MgCl2

    1 mL×2

    1 mL×10

    10101-C

    HieffTM Taq DNA Polymerase (5 U/μL)

    200 μL

    200 μL×5

    产品应用

    基因型鉴定、菌落PCR等常规PCR

    活性定义

    用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,74℃30 min内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。

    质量控制

    核酸外切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ74 ºC下孵育1 hDNA的电泳谱带无变化。

    核酸内切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA74 ºC下孵育1 hDNA的电泳谱带无变化。

    大肠杆菌残留DNA检测: 50 μL体系中,加入2 U本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。

    运输与保存方法

    冰袋运输。-20 ºC保存。

    注意事项

    为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作


    PCR反应体系(冰上配制)

    组分

    体积(μL)                     

    终浓度

    ddH2O

    to 50

    -

    10×Taq Buffer(Mg2+ Free)

    5

    25 mM MgCl2

    3

    1.5 mM

    dNTP Mix (10 mM each)

    1 μL

    0.2 mM

    模板DNA

    optional

    -

    引物1(10 μM)

    2 μL

    0.4 mM

    引物2(10 μM)

    2 μL

    0.4 mM

    HieffTM Taq DNA Polymerase (5 U/μL)

    0.4 μL

    0.04 U/μL

    【注】1Mg2+ 终浓度Mg2+最佳浓度为1.5-2 mM,如有需要,可0.2-0.5 mM为间隔向上摸索Mg2+最佳使用浓度。

    2)聚合酶添加:室温下聚合酶有一定程度的5’-3’聚合酶活性,为了防止非特异性扩增,建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中

    3)聚合酶浓度:推荐使用0.04 U/μL。可以在0.025-0.04 U/ μL之间进行优化。

    4)不同模板的推荐使用量50 μL反应体系

    模板种类

    扩增片段

    基因组DNA

    50 ng100 ng

    质粒DNA

    10 pg20 ng

    cDNA

    1~5 μL(不超过反应体系的1/10

    PCR扩增程序

    循环步骤

    温度ºC

    时间

    循环数

    预变性

    94

    30 sec-5 min

    1

    变性

    94

    30 sec

    35

    退火

    50-60

    30 sec

    延伸

    72

    60 sec/kb

    终延伸

    72

    10 min

    1

    【注】1预变性温度和时间:推荐使用94℃。预变性推荐时间:质粒DNA等简单模板为30 seccDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min;高GC含量模板为5-10 min

    2)退火温度和时间:推荐使用60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

    3)扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20℃保存,防止DNA发生降解。

    HB171127