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产品名称: Animal Tissue Direct PCR Kit 动物组织直接PCR试剂盒
  • 产品货号:10126ES50
  • 产品规格:50T
  • 产品价格:
  • 类别:常规PCR
   
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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Animal Tissue Direct PCR Kit

    10126ES50

    50 T

    288.00

    Animal Tissue Direct PCR Kit

    10126ES70

    200 T

    948.00

    产品描述

    动物组织直接PCR试剂盒是一款可直接对不同动物组织进行PCR扩增的试剂盒,适应性广、稳定性强。试剂盒中采用独特的裂解缓冲液体系,可以快速的裂解多种动物组织样品并释放出基因组DNA。整个过程不需要除去蛋白、RNA等,就释放出的基因组DNA作为模板直接用于PCR反应。此外,样品需求量小,少到5 mg动物组织即可进行实验。

    试剂盒中提供的Tissue Master Mix (UNG)具有很强的扩增兼容性,能直接以待测样品裂解液为模板,进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合物,包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分,并以dUTP替代了dTTP,另外加入了能够降解含有dUTP 模板的 UNG 酶。在PCR反应前,利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR产物,UNG 酶对不含有尿嘧啶的模板不会造成任何影响,从而保证扩增的特异性和准确性,防止了大规模基因检测时可能出现的PCR产物污染问题。

    该试剂盒可用于转基因型鉴定、动物基因分型等。 

    产品组分

    类别

    编号

    组分

    产品编号/规格

    储存

    10126ES5050T

    10126ES70200T

    Part I

    10126-A

    Buffer AL

    5 ml

    20 ml

    室温或4

    10126-B

    Protease

    220 μl

    880 μl

    4

    10126-C

    6× DNA Loading Buffer

    375 μl

    1.5 ml

    4℃或-20

    Part II

    10126-D

    2 × Tissue Master Mix(UNG)

    500 μl

    2×1 ml

    -20

    【注】:2 × Tissue Master Mix(UNG)中包含Tissue Taq DNA 聚合酶、UNG酶、dNTPdUTP替代了dTTP)、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂和稳定剂等。

    运输方法

    冰袋运输。

    保存方法

    1)试剂10126-ABuffer AL在常温干燥条件下,可保存12个月,如需保存更长时间可置于4℃

    2)试剂10126-BProtease】,具有独特配方,为保证其更好的活性和稳定性,建议4℃保存,切勿置于-20℃

    3)试剂10126-CDNA Loading Buffer】,可置于4℃-20℃长期保存。

    4)试剂10126-DTissue Master Mix(UNG)-20℃保存,避免反复冻融。

    注意事项

    1)建议使用新鲜采取的动物组织,若为长期冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响PCR效率。

    2)试剂Buffer AL若低温保存,易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间,也可在37水浴中预热10 min,以溶解沉淀,混匀后再使用。

    3电泳检测时,切勿使用含有SDSLoading Buffer,否则在电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带,影响实验结果。

    4)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

    操作方法

    1在离心管中加入100 μl Buffer AL4 μl Protease,轻轻涡旋混匀。

    【注】:Buffer ALProtease混合后尽快使用不宜长期保存

    25-10 mg动物组织,置于上述离心管中,轻轻涡旋混匀。

    【注】:组织应尽量剪碎,以便酶解反应顺利进行。

    365孵育10-30 min,然后95处理5 min

    【注】:65孵育,一般10 min即可满足多数PCR需求。若需要的DNA量较大或样品较难酶解,可将时间延长至30 min。组织块不需完全酶解,残余的部分在后续离心步骤中可被除去。

    412,000 rpm (~13,400×g )离心5 min

    5将上清转移至新的离心管,4-20保存或直接用于PCR扩增。

    【注】:用于后续PCR检测时,模板量占PCR体系的1-10%之间最佳,不能超过20%。如50 μlPCR体系中,加入0.5-5 μl裂解液即可,但不能超过10 μl

     PCR反应体系

    组分

    体积

    终浓度

    ddH2O

    7 μl

    1l

    -

    2 × Tissue Master Mix(UNG)

    10 μl

    25 μl

    1×

    Primer正向 (10 μM)

    0.5 μl

    1 μl

    0.2-0.25 μM

    Primer反向 (10 μM)

    0.5 μl

    1 μl

    0.2-0.25 μM

    裂解产物(DNA模板) 

    2 μl

    5 μl

     

    【注】:通常引物终浓度为0.2-0.25μM可以得到较好结果。反应性能较差时,可在0.1-0.5μM范围内调整引物浓度。

    PCR反应条件

    此表PCR反应条件仅供参考。PCR反应条件因模板、引物等的结构条件不同而各异。具体操作中需要根据模板类型、目的片段大小、扩增片段的碱基序列和引物的GC含量及长短等具体情况来优化最佳的反应条件,包括退火温度,延伸时间等。

    循环步骤

    温度

    时间

    循环数

    UNG酶处理

    37

    5 min

    1

    灭活UNG&预变性

    94

    5 min

    1

    变性

    94

    10 sec

    35-40

    退火a

    50-65

    20 sec

    延伸b

    72

    30 sec/kb

    终延伸

    72

    5 min

    1

    【注】:1PCR程序中的退火温度需根据引物的Tm值自行设置;

    2延伸时间需要根据片段的长度来确定,对于1 kb以内的DNA片段,建议延长时间为30 sec