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产品名称: Streptavidin (SAV) MagBeads 链霉亲和素(SAV)免疫磁珠
  • 产品货号:47503ES03
  • 产品规格:1ml
  • 产品价格:
  • 类别:磁珠分选
   
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    Streptavidin (SAV) MagBeads 链霉亲和素(SAV)免疫磁珠

    47503ES03

    1ml

    4

    728.00

    产品描述

    链亲和素(streptavidin)是一种来源于阿维丁链霉菌由四个相同亚基组成的生物素结合蛋白质,每个亚基均有一个与生物素有高亲和力的结合位点。生物学上常将链霉亲和素包被在磁珠上,借链霉亲和素-生物素高亲和力结合特性,结合生物素化蛋白,多肽,及非蛋白质(如各种 DNARNA 分子)等分子,进而从混合体系中快速分离生物素化成分,进行如亲和纯化,细胞分离,DNA 探针分析和 mRNA 分离等多方面应用。

    本品streptavidin 磁珠可配合实验需要选择生物素标记的各种单抗去分离细胞,应用范围广泛,使用灵活。其原理是在实验系统中加入生物素标记的单抗,磁珠通过 streptavidin 与生物素标记的单抗结合后,单抗与细胞表面相应抗原特异性结合而使细胞被磁珠间接捕获,从而达到纯化分离细胞的目的。

    产品性质

    磁珠含量(Beads Content

    4mg/ml

    磁珠粒径(Bead Size

    1.0±5%µm

    结合能力(Binding Capacity

    1300pmol biotin/mg 微珠

    运输和保存方法

    冰袋运输。4保存。

    注意事项

    1)免疫磁珠易沉降聚集,因此产品使用前要剧烈振荡或超声处理。

    2Fc 受体(FcR)封闭:在某些实验中,部分抗体会通过其Fc段与不同细胞表面的FcR 结合,出现非特异性反应。此时可预先将细胞与IgG 或针对FcR的特异性抗体室温孵育5-10min,一般107细胞中可加入1-10µg IgGFcR 的特异性抗体进行封闭。

    3)如果分选的细胞进一步用作细胞培养实验,所有步骤都需在无菌环境及条件下进行。

    4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    使用方法(细胞分选操作流程)

    由于不同抗体的亲和力,欲分离细胞在混合体系中所占比例以及细胞表面靶抗原密度的差异,操作流程中所提供的相关参数不一定适用于所有的细胞分选实验。因此实验前应对生物素化抗体使用浓度,磁珠与细胞反应比例,及反应时间进行滴定,优化以达到最佳的细胞分选效果。

    1. 分离单细胞:使用淋巴细胞分离液从抗凝血中提取外周血单个核细胞(PBMC),或者从淋巴组织中制备单细胞悬液。PBMC用含5%BSA0.09%NaN3PBSpH7.4 3次,40-70µm尼龙网过滤去除细胞团块和碎片后调整细胞数为2-3×107/ml

    【注】:反应体系中加入5-10%蛋白可降低非特异性反应,但蛋白浓度太高会降低分选效率。

    2. PBMC 中加入适量生物素化抗体,一般1×107 PBMC 中加入0.5-10µg 抗体,室温反应30min

    3. 1000rpm离心5min,弃上清中未结合的生物素化抗体。加入1ml磁珠分选缓冲液重悬细胞,1000rpm 离心5min,弃上清,洗2次。

    4. 1ml磁珠分选缓冲液重悬细胞,将细胞与50µl 免疫磁珠混合,室温反应30min,间隔10min轻轻晃动反应管,避免磁珠沉淀,使磁珠与细胞充分反应,尽量防止出现气泡。之后进入后续细胞分选。

    5. 细胞分选 (Negative Selection)

    5.1 阴性分选

    磁分器分离5-8min,收集未被免疫磁珠结合的细胞悬液至另一干净管中。

    加入1ml磁珠分选缓冲液重悬磁珠,用玻璃滴管或移液枪枪头反复吹打磁珠。

    重复步骤,合并两次收集的细胞悬液,可将细胞悬液再置磁分离器分离 5-8min,可明显增加靶细胞纯度。

    5.2 阳性分选 (Positive Selection)

    磁分离器分离5-8min,去除未与磁珠结合的细胞。

    结合了靶细胞的免疫磁珠用1ml 磁珠分选缓冲液洗5次(5×1ml)后,可直接进行流式检测,或者37培养48h可使细胞与磁珠分离。

     

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    优化样品pH,使样品与内毒素分离

     

    样品被污染

    树脂纯化过其他样品

    不用使用过的树脂去除不同样品内毒素

    样品回收率低

    样品非特异性吸附在树脂上

    增加样品和平衡液的NaCl浓度

    目的蛋白与内毒素结合一起

    优化样品pH,使样品与内毒素分离

     

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