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产品名称: Protein A 4FF Chromatography Column, 5ML 蛋白A纯化预装柱,5ML
  • 产品货号:36410ES08
  • 产品规格:5ml
  • 产品价格:
  • 类别:IP/Co-IP
   
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    产品名称

    产品编号

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    价格(元)

    Protein A 4FF Chromatography Column, 5ML 蛋白A纯化预装柱,5ML

    36410ES08

    5ml

    4

    1848.00

    Protein A 4FF Chromatography Column, 5ML 蛋白A纯化预装柱,5ML

    36410ES25

    5×5ml

    4

    6838.00

    产品描述

    天然蛋白AProtein A是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白,与分离自G型或C型链球菌属的蛋白G类似,主要通过与免疫球蛋白(Ig)的Fc区相互作用,结合大多数哺乳动物的IgG可用于多种抗体(单抗和多抗)的分离纯化。在与不用的免疫球蛋白亚类的结合特性上,ProteinA Protein G结合性能不太一样(详见附录1)。

    本品使用的是基因改造后的蛋白A,不仅维持其本身的Ig亲和特性,同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合,Protein A Agarose Resin 4FF以高度交联的琼脂糖凝胶为基质,重组Protein A为配基,具有很高的物理化学稳定性,可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化,适用于工业客户。利用本品经过一步亲和层析,即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体,使用方便,应用广泛。

    本品Protein A 4FF Chromatography Column,5ml是一种装填了Protein A Agarose Resin 4FF的中压预装柱,规格5ml,预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA 等,方便客户操作。

    产品性质

    基质(Matrix

    高度交联的4%琼脂糖微球

    配体(Ligand

    重组蛋白A

    孔径(Bead size

    45-165µm

    最大流速(Flowmax

    0.3MPa,3bar

    储存缓冲液(Buffer

    20%乙醇的1×PBS

    载量(Capacity

    40mg human IgG/ml 基质

    pH范围(pH range

    3-12

    运输与保存方法

    冰袋运输。4保存,2年有效。

    需准备试剂

    【注】:建议以下缓冲液在使用前用0.22μm0.45μm滤膜过滤。

    结合/洗杂缓冲液:0.15M NaCl, 20mM Na2HPO4, pH7.0

    洗脱缓冲液:0.1M甘氨酸,pH 3.0

    中和液:1M Tris-HClpH 8.5

    使用方法

    【注】:上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。

    1样品纯化(以Akta系统为例)

    1准备:将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。

    2清洗3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。

    3平衡:5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

    4上样:将样品加到平衡好的层析柱中,推荐流速1-5ml/min,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。

    【注】:样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。

    5洗杂:10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,直到紫外吸收达到一个稳定的基线,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。

    6洗脱:用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。

    7清洗及保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。

    2 SDS-PAGE检测

    将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。

    3 树脂清洗

    随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量下降,影响柱子的性能,这时需对柱子进行清洗:

    1)去除沉淀或变性物质

    2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗;

    5倍柱体积的PBSpH 7.4 清洗。

    2)去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质

    3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗;

    5倍柱体积的PBS, pH 7.4 清洗

    注意事项

    1)请勿冷冻保存本产品。

    2)所有操作过程中,样本需要在4或冰上操作。

    3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

     

    附录1. 蛋白AG对不同物种Ig的结合能力总表

    免疫球蛋白亚型

    Protein A

    Protein G 

    免疫球蛋白亚型

    Protein A

    Protein G 

    Human IgG

    ++++

    ++++

    Mouse IgG

    ++++

    ++++

    Human IgG1

    ++++

    ++++

    Mouse IgG1

    +

    ++++

    Human IgG2

    ++++

    ++++

    Mouse IgG2a

    ++++

    ++++

    Human IgG3

    +

    ++++

    Mouse IgG2b

    +++

    +++

    Human IgG4

    ++++

    ++++

    Mouse IgG3

    ++

    +++

    Human IgM

    Use anti-Human IgM

    Mouse IgM

    Use anti-Mouse IgM

    Human IgE

    NR

    NR

    Chicken IgG (IgY)

    NR

    NR

    Human IgA

    +

    NR

    Cow IgG

    ++

    ++++

    Human IgA1

    +

    NR

    Goat IgG

    +

    ++++

    Human IgA2

    +

    NR

    Goat IgG1

    +

    ++++

    Human IgD

    Use anti-Human IgD

    Goat IgG2

    ++++

    ++++

    Rat IgG

    +

    ++

    Goat IgM

    NR

    NR

    Rat IgG1

    NR

    +

    Guinea Pig IgG

    ++++

    ++

    Rat IgG2a

    NR

    ++++

    Guinea Pig IgG1

    ++++

    ++

    Rat IgG2b

    NR

    +

    Guinea Pig IgG2

    ++++

    ++

    Rat IgG3

    +

    ++

    Hamster IgG

    +

    ++

    Sheep IgG

    +

    ++

    Horse IgG

    +

    ++++

    Sheep IgG1

    +

    ++

    Rabbit IgG

    ++++

    +++

    Sheep IgG2

    +

    ++

    Rabbit IgM

    NR

    NR

    Sheep IgM

    NR

    NR

    Rabbit All isotypes

    +++

    ++

    Pig IgG

    +++

    +++

    Monkey IgG

    ++++

    ++++

    Cat IgG

    ++++

    +

    Donkey IgG

    ++

    ++++

    Dog IgG

    ++++

    +

     

     

     

    (+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested;

     

    附录2 常见问题与解答

    问题

    可能原因

    推荐解决方法

    柱子反压过高

    填料被堵塞

    清洗填料

    裂解液中含有微笑的固体颗粒,建议上柱前使用0.22µm/0.45µm滤膜过滤。

    样品纯化过程中曲线不稳

    样品或 buffer 中有气泡

    赶出气泡

    样品和buffer进行脱气

    洗脱组分中没有目的蛋白

    样品中抗体浓度太低

    使用其抗原做配体的介质

    抗体被降解

    适当的提高洗脱pH

    样品与Protein A结合力低

    换用Protein GProtein A/G树脂纯化

    回收率逐渐减低

    上样量太多

    减少上样量

    柱子太脏,载量降低

    清洗树脂

     

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