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产品名称: Protein G Agarose Beads 4FF 快速蛋白G琼脂糖珠
  • 产品货号:36406ES08
  • 产品规格:5ml
  • 产品价格:
  • 类别:IP/Co-IP
   
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    价格(元)

    Protein G Agarose Beads 4FF 快速蛋白G琼脂糖珠

    36406ES08

    5ml

    4

    978.00

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    25ml

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    Protein G Agarose Beads 4FF 快速蛋白G琼脂糖珠

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    100ml

    4

    8726.00

    产品描述

    天然蛋白GProtein G是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白,与发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面的蛋白A类似,主要通过与免疫球蛋白(Ig)的Fc区相互作用,结合大多数哺乳动物的IgG可用于多种抗体(单抗和多抗)的分离纯化。在与不用的免疫球蛋白亚类的结合特性上,ProteinA Protein G结合性能不太一样,相比ProteinA   ProteinG 对牛、羊、马等多克隆抗体有更强的结合力,它还可以结合不能与ProteinA很好结合的大鼠lgG、人lgG3和小鼠lgG1(详见附录1)。

    本品使用的是基因改造后的蛋白G,不仅维持其本身的Ig亲和特性,同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合,Protein G Agarose Resin 4FF以高度交联的琼脂糖凝胶为基质,重组Protein G为配基,具有很高的物理化学稳定性,可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化,适用于工业客户。利用本品经过一步亲和层析,即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体,使用方便,应用广泛。

    产品性质

    基质(Matrix

    高度交联的4%琼脂糖微球

    配体(Ligand

    重组蛋白G

    孔径(Bead size

    45-165µm

    最大流速(Flowmax

    0.3MPa,3bar

    储存缓冲液(Buffer

    20%乙醇的1×PBS

    载量(Capacity

    30mg human IgG/ml 基质

    pH范围(pH range

    3-10

    运输与保存方法

    冰袋运输。4保存,2年有效。

    需准备试剂

    【注】:建议以下缓冲液在使用前用0.22μm0.45μm滤膜过滤。

    结合/洗杂缓冲液:0.15M NaCl, 20mM Na2HPO4, pH7.0

    洗脱缓冲液:0.1M甘氨酸,pH 3.0

    中和液:1M Tris-HClpH 8.5

     使用方法

    【注】:上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。

    1 Protein G Agarose Resin 4FF的装填

    1)用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头,确保柱底筛板上无气泡,关闭柱底出口,并在柱底部留出1-2cm的去离子水。

    2)将树脂悬浮起来,小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。

    3)如果使用储液器,应立即在层析柱和储液器中加满水,将进样分配器放置于浆液表面,连接至泵上,避免在分配器或进样管中产生气泡。

    4)打开层析柱底部出口,开起泵,使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱,然后缓慢增加至最终流速, 这样可避免液压对所形成柱床的冲击,避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速,可以用所使用泵的最大流速,这样也可以得到一个很好的装填效果。

    【注】:在随后的色谱程序中,不要超过最大装柱流速的75%,当柱床高度稳定后,在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。

    5)关闭泵,关闭层析柱出口。

    6)如果使用储液器,去除储液器,将分配器至于层析柱中。

    7)将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器,锁紧分配器接头。

    8)将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中,开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。

    2 样品纯化

    1平衡:5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

    2上样:将样品加到平衡好的Protein G Agarose Resin 4FF中,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。

    3洗杂: 10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。

    4洗脱: 使用 5-10 倍柱体积的洗脱Buffer,收集洗脱液,即目的蛋白组分。

    5清洗及保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的 20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。

    3 SDS-PAGE检测

    将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。

    4 树脂清洗

    随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量下降,影响柱子的性能,这时需对柱子进行清洗:

    1)去除沉淀或变性物质

    2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗;

    5倍柱体积的PBSpH 7.4 清洗。

    2)去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质

    3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™X-100清洗;

    5倍柱体积的PBS, pH 7.4 清洗

    注意事项

    1)请勿冷冻保存本产品。

    2Protein G琼脂糖珠使用前一定要充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。

    3)所有操作过程中,样本需要在4或冰上操作。

    4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    附录1. 蛋白AG对不同物种Ig的结合能力总表

    免疫球蛋白亚型

    Protein A

    Protein G 

    免疫球蛋白亚型

    Protein A

    Protein G 

    Human IgG

    ++++

    ++++

    Mouse IgG

    ++++

    ++++

    Human IgG1

    ++++

    ++++

    Mouse IgG1

    +

    ++++

    Human IgG2

    ++++

    ++++

    Mouse IgG2a

    ++++

    ++++

    Human IgG3

    +

    ++++

    Mouse IgG2b

    +++

    +++

    Human IgG4

    ++++

    ++++

    Mouse IgG3

    ++

    +++

    Human IgM

    Use anti-Human IgM

    Mouse IgM

    Use anti-Mouse IgM

    Human IgE

    NR

    NR

    Chicken IgG (IgY)

    NR

    NR

    Human IgA

    +

    NR

    Cow IgG

    ++

    ++++

    Human IgA1

    +

    NR

    Goat IgG

    +

    ++++

    Human IgA2

    +

    NR

    Goat IgG1

    +

    ++++

    Human IgD

    Use anti-Human IgD

    Goat IgG2

    ++++

    ++++

    Rat IgG

    +

    ++

    Goat IgM

    NR

    NR

    Rat IgG1

    NR

    +

    Guinea Pig IgG

    ++++

    ++

    Rat IgG2a

    NR

    ++++

    Guinea Pig IgG1

    ++++

    ++

    Rat IgG2b

    NR

    +

    Guinea Pig IgG2

    ++++

    ++

    Rat IgG3

    +

    ++

    Hamster IgG

    +

    ++

    Sheep IgG

    +

    ++

    Horse IgG

    +

    ++++

    Sheep IgG1

    +

    ++

    Rabbit IgG

    ++++

    +++

    Sheep IgG2

    +

    ++

    Rabbit IgM

    NR

    NR

    Sheep IgM

    NR

    NR

    Rabbit All isotypes

    +++

    ++

    Pig IgG

    +++

    +++

    Monkey IgG

    ++++

    ++++

    Cat IgG

    ++++

    +

    Donkey IgG

    ++

    ++++

    Dog IgG

    ++++

    +

     

     

     

    (+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested;

     

    附录2 常见问题与解答

    问题

    可能原因

    推荐解决方法

    柱子反压过高

    筛板被堵塞

    清洗或更换筛板

    填料被堵塞

    清洗填料

    裂解液中含有微笑的固体颗粒,建议上柱前使用0.22µm/0.45µm滤膜过滤。

    样品纯化过程中曲线不稳

    样品或 buffer 中有气泡

    赶出气泡

    样品和buffer进行脱气

    洗脱组分中没有目的蛋白

    样品中抗体浓度太低

    使用其抗原做配体的介质

    抗体被降解

    适当的提高洗脱pH

    样品与Protein G结合力低

    换用Protein AProtein A/G树脂纯化

    回收率逐渐减低

    上样量太多

    减少上样量

    柱子太脏,载量降低

    清洗树脂

     

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