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产品名称: iFluorTM 647 phalloidin iFluor™ 647标记鬼笔环肽(远红)
  • 产品货号:40762ES75
  • 产品规格:300T
  • 产品价格:
  • 类别:荧光探针/细胞染色
   
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    iFluorTM 647 phalloidin iFluor647标记鬼笔环肽(远红)

    40762ES75

    300 T

    -20℃避光保存

    2126.00

    背景描述

    鬼笔环肽(Phalloidin)是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)的环状七肽毒素,以高亲和力(Kd= 20 nM)选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin,而不会与单体肌动蛋白G-actin结合,通常用来标记组织切片细胞培养物或无细胞体系中的F-actin,从而对F-actin进行定性和定量分析。另外,鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维,无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞,按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略,染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此,鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白(Actin)抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小,直径约12-15Å,分子量<2000 Daltons,未标记肌动蛋白(Actin)的许多生理特性都得以维持,比如,同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白,原肌球蛋白,DNase I等仍能发生反应;鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质;以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。

    鬼笔环肽(Phalloidin)的结合阻止丝状肌动蛋白(微丝)的解离,稳定微丝结构,从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度(CC)降至<1 µg/mL,因此,可用作一种聚合促进剂。此外,鬼笔环肽还可抑制F-actinATP水解活性。

    本品为iFluorTM 647标记的鬼笔环肽具有高亮度和光稳定性,且染色反应特异性强,对比性高,具有比Actin抗体更好的染色效果,适合用作F-actin的定性和定量检测。iFluorTM 647鬼笔环肽染色与用于细胞分析的其他荧光染色完全兼容,包括荧光蛋白、Qdot® 纳米晶体和其他iFluorTM偶联物(包含iFluorTM偶联二抗另外,经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性,适用性广泛。

    产品性质 

    分子量(Molecular Weight

    2200

    最大激发/发射波长(Ex/Em

    650/665 nm

    溶解性(Solubility

    溶于DMSO

    结构式(Structure

     

    运输与保存方法

    冰袋运输。收到货后-20℃避光干燥保存,1年有效。

    注意事项

    1) 鬼笔环肽具有毒性,需小心操作(对人的半数致死剂量LD502 mg/kg)。

    2) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    需要自备材料

    11×PBS缓冲液, pH 7.4,细胞培养级别(货号:60145ES76

    2)固定液4%多聚甲醛(不含甲醇)(溶于PBS缓冲液)(货号:36314ES60

    3)透化液Triton X-100(溶于PBS缓冲液)

    4BSA,标准级别(货号:36101ES25

    5DAPI染液(即用型)(货号:40728ES50

    操作步骤

    1染色液的配置

    1) 母液的配置:使用前将本品回温至室温并简短离心,加入30 μL DMSO使其充分溶解,混匀即可获得1000×iFluorTM 647标记鬼笔环肽母液。根据实验情况,对其分装并于-20℃避光干燥保存。

    2) 工作液的配置:吸取1 µL1000×iFluorTM 647标记鬼笔环肽母液至1 mL PBS(含1%BSA)缓冲液中即可得到1×工作液。

    】:不同的细胞染色情况不同,相应iFluorTM 647鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。

    2. 染色步骤

    1)细胞培养过夜或更长,使其密度达到50-60%汇合度。

    2)吸掉培液,37℃预热的1×PBSpH 7.4)清洗细胞2次。

    3)使用溶于PBS4%甲醛溶液进行细胞固定,室温固定10-30 min

    】:避免固定剂中含有甲醇成分,因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。

    4) 室温条件下,用PBS清洗细胞2~3次,每次10 min

     (可选):室温条件下,用溶于PBS0.1% Triton X-100溶液透化处理3-5 min,从而增加其通透性。

    5)室温条件下,用PBS清洗细胞2~3次,每次10 min

    6) 取足够量新鲜配好 iFluorTM 647标记鬼笔环肽工作液以覆盖住细胞,如:100 µL/孔(96孔板),室温避光染色20-90 min

    7)用PBS清洗细胞3次,每次5 min

     (可选):加入足量的即用型DAPI溶液对细胞核进行复染,如:100 µL/孔(96孔板),室温3~5 min。用PBS清洗细胞2次,每次5 min

    8)于荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察,选择iFluorTM 647激发/发射滤片(Ex/Em=650/665 nm)和/DAPI激发/发射滤片(Ex/Em=364/454 nm)。

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