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产品名称: FITC Phalloidin FITC标记鬼笔环肽
  • 产品货号:40735ES75
  • 产品规格:300T
  • 产品价格:
  • 类别:荧光探针/细胞染色
   
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    产品名称

    产品编号

    规格

    外观

    储存

    价格(元)

    FITC Phalloidin FITC标记鬼笔环肽

    40735ES75

    300T

    液体

    -20℃避光保存

    766.00

    FITC Phalloidin FITC标记鬼笔环肽

    40735ES80

    1mg

    冻干粉

    -20℃避光保存

    6456.00

    背景描述

    鬼笔环肽(Phalloidin)是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)的环状七肽毒素,以高亲和力(Kd= 20 nM)选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin,而不会与单体肌动蛋白G-actin结合,通常用来标记组织切片,细胞培养物或无细胞体系中的F-actin,从而对F-actin进行定性和定量分析。另外,鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维,无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞,按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略,染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此,鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白(Actin)抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小,直径约12-15Å,分子量<2000 Daltons,未标记肌动蛋白(Actin)的许多生理特性都得以维持,比如,同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白,原肌球蛋白,DNase I等仍能发生反应;鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质;以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。

    鬼笔环肽(Phalloidin)的结合阻止丝状肌动蛋白(微丝)的解离,稳定微丝结构,从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度(CC)降至<1µg/mL,因此,可用作一种聚合促进剂。此外,鬼笔环肽还可抑制F-actinATP水解活性。

    本品为FITC标记的鬼笔环肽,染色反应特异性强,对比性高,具有比Actin抗体更好的染色效果,适合用作F-actin的定性和定量检测。另外,经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性,适用性广泛。

    我司分别提供冻干粉形式(货号:40735ES80)和储存液形式(货号:40735ES75,浓度为20µM)的FITC标记鬼笔环肽,用户根据自身需求选择。建议使用浓度为80~200nM

    产品性质

    分子式(Molecular Formula

    C56H60N10O15S2

    分子量(Molecular Weight

    1177.3

    最大激发/发射波长(Ex/Em

    495~496/513~516nm

    多肽序列(Sequence

    FITC-bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-Leu)(S-3 to 6)

    外观(Appearance

    黄色粉末(冻干粉)

    溶解性(Solubility

    溶于DMSODMF、甲醇或者乙腈水溶液(20%

    运输与保存方法

    冰袋运输。-20℃避光干燥保存,1年有效。

    注意事项

    1)   鬼笔环肽具有毒性,需小心操作(对人的半数致死剂量LD502mg/kg)。

    2)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

     需要自备材料

    1)   (可选)甲醇

    2)   1×PBS缓冲液, pH 7.4, 细胞培养级别(货号:60145ES76

    3)   固定液4%多聚甲醛(溶于PBS缓冲液)(货号:36314ES60

    4)   丙酮或透化液0.5% Triton X-100(溶于PBS缓冲液)

    5)   Fluoromount-GTM 水溶性封片剂(不含DAPI)(货号:36307ES08),DAPI(货号:40727ES10

    6)   (可选)DAPI Fluoromount-GTM 水溶性封片剂(含DAPI)(货号:36307ES08

    7)   (可选)BSA,标准级别(货号:36101ES25

    8)   载玻片和盖玻片

    9)   盖玻片周围密封液(如透明指甲油)

    10)组装有FITC激发/发射滤片,以及DAPI激发/发射滤片的荧光显微镜或共聚焦显微镜

    操作步骤

    1.        工作液准备

    1)   对于FITC标记鬼笔环肽(货号:40735ES75300T

    本品以溶于甲醇的20µM储存液形式提供,总量为300µL。按照100nM的工作液浓度来换算,可制备总量为60mL的工作液。建议收到产品后,根据单次使用量,对母液进行小量分装,-20℃避光冻存,一年稳定。

    开始实验前,使用1×PBS缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为:80~200nM。工作液现配现用。

    2)   对于FITC标记鬼笔环肽(货号:40735ES801mg

    本品以冻干粉形式提供,分子量为1177.3,总量为1mg。可先用甲醇或者DMSO充分溶解配制成20~100µM的储存液。如,加入8.494mL甲醇到1mg鬼笔环肽即得到100µM等量的储存液,根据单次使用量,进行小量分装,-20℃避光冻存,一年稳定。

    开始实验前,使用1×PBS缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为:80~200nM。工作液现配现用。

    2.       染色步骤

    1)   细胞爬片生长24h,使其密度达到50%汇合度。

    2)   吸掉培养液,37℃预热的1×PBSpH 7.4清洗细胞2次。

    3)   使用溶于PBS4%甲醛溶液进行细胞固定,室温固定10min

    注意:避免固定剂中含有甲醇成分,因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。

    4)   室温条件下,用PBS清洗细胞2~3次,每次10min

    5)   室温条件下,用丙酮(≤-20℃)脱水或者用0.5% Triton X-100溶液透化处理5min

    6)   室温条件下,用PBS清洗细胞2~3次,每次10min

    7)   200µL配制好的 FITC标记鬼笔环肽工作液,覆盖住盖玻片上的细胞,室温避光孵育30min(通常情况下,4~37℃孵育皆可)。

    注意:为了降低背景,可于FITC标记的鬼笔环肽工作液内加入1% BSA;另外,孵育过程中为了避免溶液挥发,可将盖玻片转移到一个密封的容器内。

    8)   PBS清洗盖玻片3次,每次5min

    9)   使用200µL DAPI溶液(浓度:100 nM)对细胞核进行复染,约30s

    10)PBS清洗盖玻片,然后倒置在已经滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片剂的载玻片上。使用纸巾轻轻檫掉多余封片剂,然后用指甲油永久封片。此法制备的标本玻片可置于4℃避光保存,通常6个月内可继续做F-actin染色分析。

    注意:也可以直接使用含有DAPI的抗荧光淬灭封片剂(货号:36308ES11)合并步骤910),简化步骤。

    11)荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察,选择FITC激发/发射滤片(Ex/Em=496/516nm)和DAPI激发/发射滤片(Ex/Em=364/454nm)。

     

    HB180502