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产品名称: Indo-1, AM,Cell Permeable 细胞可渗透钙离子荧光探针
  • 产品货号:40775ES50
  • 产品规格:50μg
  • 产品价格:
  • 类别:荧光探针/细胞染色
   
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    价格(元)

    Indo-1, AM,Cell Permeable 细胞可渗透钙离子荧光探针

    40775ES50

    50μg

    -20℃避光干燥

    248.00

    Indo-1, AM,Cell Permeable 细胞可渗透钙离子荧光探针

    40775ES72

    5×50μg

    -20℃避光干燥

    948.00

    Indo-1, AM,Cell Permeable 细胞可渗透钙离子荧光探针

    40775ES80

    1mg

    -20℃避光干燥

    1268.00

    产品描述

    Indo-1是一种细胞生物学常用的钙离子荧光探针,与Fura-2为目前使用最广泛的比率法测定的钙荧光指示剂,Indo-1能特异性地结合Ca2+,同时可发出荧光,结合Ca2+后的最大发射波长从结合前的475nm400nmCa2+饱和时)偏移,该信号变化可被流式细胞仪较好的捕捉:在氩离子激光器的351-364光谱范围内单一波长激发该探针,在400nm475nm的波长处分别检测结合钙离子和未结合钙离子的荧光信号,通过二者荧光强度的比率测定钙离子浓度。

    由于Indo-1是极性大的酸性化合物,无法进入细胞内,为此在其负性基团上结合乙酰氧甲酯,使其成为Indo-1/AM,该变化既增加了酯溶性又消除了负电荷,极大的提高了细胞渗透性。在细胞内,Indo-1/AM被酯酶水解成Indo-1后可与胞浆游离Ca2+可逆性结合。

    产品性质

    CAS号(CAS NO.

    112926-02-0

    分子式(Formula

    C47H51N3O22

    分子量(Molecular Weight

    1009.91

    Ex/Em

    346nm/475nm

    溶解性(Solubility

    溶于DMSO

    结构式(Structure

    运输和保存方法

    冰袋运输。-20℃避光干燥保存,有效期6个月。

    注意事项

    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    需要试剂准备

    1 (可选)配制Pluronic F-127母液:100mg Pluronic F-127粉末(Cat No. 60318ES60)中加入0.5ml DMSO,配制成20%(w/v)DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存,不要冷藏。如果有结晶析出,可以重新加热后溶解,不影响使用。

     2Hanksbalanced salt solutionHBSS,不含Ca2+, Mg2+Cat No. 60161ES76

    使用方法(本实验方案仅供参考,为得到最理想实验结果,需根据具体的实验情况优化实验条件。)

    1Indo-1/AM储存液的配制

    利用高质量无水DMSO溶解Indo-1/AM配制成2-5mM的储存液,该储存液可分装于-20℃避光干燥密封保存。每次使用前需回温至室温。

    【注】: 因为Indo-1/AM在水中的溶解性和稳定性较差,不可用水溶性缓冲液配制Indo-1/AM储存液。

    溶解用的DMSO需要保证新鲜无水,否则将会导致AM 体水解,使荧光染料无法进入细胞,影响实验效果。

    2Indo-1/AM工作液的配制

    利用合适缓冲液(Hanks & Hepes )Indo-1/AM稀释成1-10μM的工作液,具体稀释方法如1 mM母液配制1 ml浓度为4 µM工作液,用1 ml 缓冲液稀释4 µl 1mM母液即可,混匀。

    【注】: 典型工作液浓度为0.1-5μM,对于大多数细胞,我们推荐加载浓度4-5μM,具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性,建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

    Indo-1/AM工作液需现配现用,避免反复冻存。

    3)(可选)如果Indo-1/AM进入细胞的效果不好,可向 Indo-1/AM/DMSO 储存液中加入适量20% Pluronic F127溶液,最终稀释至其终浓度为0.02-0.05%Pluronic F127 可以防止 Indo-1/AM在缓冲液中聚合并能帮助其进入细胞。

    【注】:Pluronic F127可降低Indo-1/AM的稳定性,因此只建议在配制工作液时加入,不建议将其加入储存液长期保存。

    4取出预培养的细胞,除去培养基,使用缓冲液洗涤细胞3次。

    【注】:如果使用含血清的培养基,血清中的酯酶会分解 AM 体,从而降低Indo-1/AM进入细胞的效果。另外含有酚红的培养基会使本底值略微偏高,所以加工作液之前需尽量去除培养基残留。

    5 Indo-1/AM工作液加入细胞,加入量以覆盖细胞为准。在37℃培养15-60min,然后除去Indo-1/AM工作液。

    【注】:关于孵育的时间,如果首次做实验不能确定,建议先孵育30min,看荧光效果:如果细胞死亡较多,适当缩短时间;如果荧光强度太弱,适当延长时间。

    6用不含探针缓冲液洗涤细胞 3 次,以充分去除残留的Indo-1/AM工作液。然后加入缓冲液覆盖细胞。

    737℃培养箱孵育约 20-30min,以确保 AM 体在细胞内的完全去酯化作用。

    8流式细胞仪检测细胞。

    【注】: 某些细胞会将荧光探针被动运输或分泌到胞外,在一些通过阴离子泵泄漏探针的细胞内该现象尤其严重,此时需加入一些抑制剂防止该情况的发生,如加入适量的丙磺舒或磺吡酮。但需注意,抑制剂的加入量必须经过优化,过量的抑制剂也会对细胞造成不利影响。

    某些细胞具有自体荧光会影响结果分析,需使用未加载探针细胞做对照,在结果分析时在同一波长下扣除自荧光。

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