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产品名称: Lymphocyte Separation Medium 1.077 淋巴细胞分离液 1.077
  • 产品货号:40503ES60
  • 产品规格:100ml
  • 产品价格:
  • 类别:细胞分离
   
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    价格(元)

    Lymphocyte Separation Medium 1.077 淋巴细胞分离液1.077

    40503ES60

    100ml

    室温

    219.00

    Lymphocyte Separation Medium 1.077 淋巴细胞分离液1.077

    40503ES76

    5×100ml

    室温

    989.00

     产品描述

    淋巴细胞分离液(Lymphocyte Separation Medium,简称LSM)是一种无菌的即用型分离液,基于BöyumFicoll-甲泛影钠溶液做过一些改良,使得操作简单快速且分离效率更高。每100 ml淋巴细胞分离液中含有6.2 g 聚蔗糖(Ficoll)和9.4 g 泛影酸钠,20℃下的密度为1.0770-1.0800 g/ml。不仅适用于外周血淋巴细胞,也可分离其他组织来源的淋巴细胞,包括脐带血和骨髓细胞。

    工作原理

    去纤维蛋白或肝素化人血以11的比例用生理盐水或平衡盐溶液稀释,加在分离液上层,之后低速离心30 min。在离心过程中,差速迁移使其最终形成几个细胞分层。聚集在管底的颗粒主要是红细胞和多形核粒细胞,通过梯度迁移至管底。根据其密度的大小,淋巴细胞和其他单个核细胞如单核细胞,以及血小板分布在血浆和LSM两层之间。淋巴细胞可以通过吸取分界层溶液回收,并通过进一步清洗来去除血小板,LSM和血浆。

    运输与保存方法

    室温运输。

    室温(15-30 °C)避光保存。 若溶液变浑浊,呈现出不同的黄色或可能有受污染迹象,不可再使用。

    操作方法

    注:此操作流程适用于去纤维蛋白或抗凝血剂处理过的人血。对于其他物种或者其他组织的血液,可能需要对此步骤做出一定的改进。

     


     

     

    1)轻轻颠倒瓶子使LSM充分混合;

    2)无菌条件转移3 ml LSM15 ml离心管中;

    3)用2 ml 生理盐水混合2 ml去纤维蛋白血液或肝素化血液;

    4)小心将稀释血液加入3 ml LSM(室温即可)的上层,使得在血液和LSM间形成一个明显的分层。不要将稀释血液混入LSM

    5)室温下400g离心15-30min,离心可以沉淀红细胞和多形核白细胞,同时可以在LSM上形成一层单核-淋巴细胞分层,如下图所示(从上到下,依次分为血浆层-淋巴细胞层-LSM-RBC颗粒);

    6)吸出淋巴细胞层上方2-3 mm内的血浆;

    7)吸取淋巴细胞层以及它下面一半的LSM层,并转移到另外一个离心管。加入等体积的平衡盐缓冲液至离心管内的淋巴细胞层中,室温离心10 min,离心速度设定在既不损伤细胞又能沉淀细胞的范围,例如160 – 260 g(清洗去除LSM和降低血小板含量);

    8)用平衡盐缓冲液再清洗细胞一次,最后取适当的培养基重悬细胞。

    注意事项

    1)稀释去纤维蛋白血液或肝素化血液用的生理盐水为无菌液体;

    2)为保持淋巴细胞的活性,应该采血后尽快进行分离。分离细胞层实际上是单个核细胞层,包括淋巴细胞和单核细胞。

    3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;