7×24小时 服务热线:400-6111-883  翊圣微信:
产品名称: Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒
  • 产品货号:40310ES20
  • 产品规格:20T
  • 产品价格:
  • 类别:细胞凋亡
   
  • 产品简介
  • 实验数据
  • 文档资料
  • 相关产品
  • 论文发表
  •  产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    储存

    价格(元)

    Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

    Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒

    40310ES20

    20T

    4℃避光保存

    480.00

    40310ES50

    50T

    4℃避光保存

    960.00

    40310ES60

    100T

    4℃避光保存

    1680.00

    产品描述

    Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒是用红色荧光染料PEPhycoerythrin)标记的Annexin V作为探针,来检测细胞早期凋亡的发生,可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

    其检测原理为:在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserinePS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KDCa2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

    另外,本试剂盒中提供的7-AAD用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。7-AAD是一种核酸染料,同PI有着相似的荧光特性,但其发射光谱较PI窄,对其他检测通道的干扰更小,在多色荧光分析中是PI的最佳替代品,可与Annexin V联合使用。该染料不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但可穿透晚期凋亡细胞或者坏死细胞并与其内的DNA结合。因此将Annexin V-PE7-AAD联合使用时,7-AAD则被排除在活细胞(Annexin V-/7-AAD-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/7-AAD-)之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Annexin V-PE7-AAD结合染色呈现双阳性(Annexin V+/7-AAD+)。

    产品组分

    编号

    组分名称

    产品编号/规格

    40310ES2020T

    40310ES5050T

    40310ES60100T

    40310-A

    重组人Annexin V/PE*rh Annexin V/PE

    100µl

    250µl

    500µl

    40310-B

    7-AAD Viability Staining Solution20µg/ml

    200µl

    500µl

    1.0ml

    40310-C

    4×Binding Buffer**

    4ml

    10ml

    20ml

    *来源于大肠杆菌(E.coli),分子量为35.8 KDa,纯度>98%SDS-PAGE&HPLC

    运输与保存方法

    冰袋(wet ice)运输。本试剂盒中所有组分均在4保存,勿冰冻Annexin V-PE7-AAD需避光保存。一年有效。

    注意事项

    1)    试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。

    2)    由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。

    3)    对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,7-AAD摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-PE的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTAEDTA会影响Annexin VPS的结合。

     4)    如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并低速离心(200×g)洗去血小板,然后用Annexin V结合缓冲液清洗细胞,以避免残留的EDTA会螯合Ca2+

    5)    7-AAD为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。

    6)    Annexin V-PE7-AAD是光敏物质,在操作时请注意避光。

    使用说明

    1           样品染色

    1 悬浮细胞:300g4离心5 min收集细胞。

    贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化后,300g4离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长,以防引起假阳性。

    2)     配制1×Binding Buffer:用去离子水4倍稀释4×Binding Buffer4ml 结合缓冲液+12ml 去离子水)

    3)     4℃预冷的PBS洗涤细胞2次,每次均需300g4离心5 min

    4)     加入250 μl 1×Binding Buffer重悬细胞,调节其浓度为1×106细胞/ml

    5)     100 μl细胞悬液于5ml流式管中,加入5μl Annexin V/PE10 μl 7-AAD,轻轻混匀。

    6)     避光、室温反应15 min

    7)     加入400 μl 1×Binding Buffer,混匀,样品在1小时内检测。

    注:为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。

    观察检测

    A、流式细胞仪分析

    1)用流式细胞仪检测,激发波长Ex=488nm;发射波长Em=578nmAnnexin V-PE的橙红色荧光建议使用FL2通道检测;激发波长Ex=546nm;发射波长Em=647nm7-AAD红色荧光建议使用FL3通道检测。CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),PE为横坐标,7-AAD为纵坐标。每个样采集10,000 events。典型的实验中,细胞可以分成三个亚群,活细胞仅呈很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅呈较强的橙红色荧光,晚期凋亡细胞呈橙红和红色荧光双重染色。

    2)荧光补偿调节:使用未经凋亡诱导处理的正常细胞,作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。

    B、荧光显微镜观察

    1)滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞;

    2)对于贴壁细胞来说,也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡;

    a 将细胞于盖玻片上生长,用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡,并设立阴性对照组;

    b PBS洗涤细胞两次;

    c 500μlBinding Buffer 中加入1μl Annexin V-PE5μl 7-AAD染液混匀;

    d 将上述溶液滴加于盖玻片表面,使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖;

    e 室温避光孵育5min

    3)将盖玻片倒置于载玻片上,在荧光显微镜下用双色滤光片观察。滤光片(罗丹明)观察Annexin V-PE 荧光信号呈橙红色;用激发波长546nm,发射波长647nm,观察7-AAD荧光信号呈红色。

    相关产品

    产品编号

    产品名称

    规格

    价格(元)

    40301ES50

    细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒

    50T

    298.00

    40302ES20

    Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒

    20T

    480.00

    40303ES20

    Annexin V-EGFP/PI 细胞凋亡检测试剂盒

    20T

    480.00

    40304ES20

    Annexin V-Alexa Fluor 647/PI 细胞凋亡检测试剂盒

    20T

    518.00

    40305ES20

    Annexin V-Alexa Fluor 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒

    20T

    518.00

    40306ES20

    TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC

    20T

    1178.00

    40307ES20

    TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Alexa Fluor 488

    20T

    1250.00

    40308ES20

    TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Alexa Fluor 647

    20T

    1250.00

    40309ES20

    Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒

    20T

    989.00

    40310ES20

    Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒

    20T

    480.00